中国防痨杂志
中國防癆雜誌
중국방로잡지
BULLETIN OF THE CHINESE ANTITUBERCULOSIS ASSOCIATION
2009年
10期
565-569
,共5页
刘忠华%丁元生%毕爱笑%冯永红%金瑞良%杨华%秦莲花%胡忠义
劉忠華%丁元生%畢愛笑%馮永紅%金瑞良%楊華%秦蓮花%鬍忠義
류충화%정원생%필애소%풍영홍%금서량%양화%진연화%호충의
分枝杆菌%结核%重组融合蛋白质类%血清学试验
分枝桿菌%結覈%重組融閤蛋白質類%血清學試驗
분지간균%결핵%중조융합단백질류%혈청학시험
目的 构建重组结核分枝杆菌38 kD-16 kD融合蛋白,评价其在结核病血清学诊断方面的价值.方法 通过聚合酶链反应扩增获得16 kD和38 kD基因片段,分别连接到表达载体pET21a中,同时将2片段2次连接到表达载体pET21a中,形成38 kD-16 kD(3 816),16 kD,38 kD重组载体;经表达、纯化和复性后,通过Western blot分析,以酶联免疫吸附试验检测184例血清抗体,肺结核患者96例、非结核肺部疾病患者50例,正常对照38例.结果 成功构建重组质粒pET21a-3816,表达蛋白经SDS-PAGE后显示相对分子质量约为65 kD,重组蛋白经镍柱纯化后,纯度均达90 %以上;经 Western blotting 证实重组蛋白能与结核病患者血清反应;重组蛋白3816血清检测,其敏感性为80.2%(77/96),特异性为90.9%(80/88).结论 成功表达和纯化了3816融合蛋白,其对血清学检测证明重组融合蛋白有希望成为结核病血清学诊断的有效候选者之一.
目的 構建重組結覈分枝桿菌38 kD-16 kD融閤蛋白,評價其在結覈病血清學診斷方麵的價值.方法 通過聚閤酶鏈反應擴增穫得16 kD和38 kD基因片段,分彆連接到錶達載體pET21a中,同時將2片段2次連接到錶達載體pET21a中,形成38 kD-16 kD(3 816),16 kD,38 kD重組載體;經錶達、純化和複性後,通過Western blot分析,以酶聯免疫吸附試驗檢測184例血清抗體,肺結覈患者96例、非結覈肺部疾病患者50例,正常對照38例.結果 成功構建重組質粒pET21a-3816,錶達蛋白經SDS-PAGE後顯示相對分子質量約為65 kD,重組蛋白經鎳柱純化後,純度均達90 %以上;經 Western blotting 證實重組蛋白能與結覈病患者血清反應;重組蛋白3816血清檢測,其敏感性為80.2%(77/96),特異性為90.9%(80/88).結論 成功錶達和純化瞭3816融閤蛋白,其對血清學檢測證明重組融閤蛋白有希望成為結覈病血清學診斷的有效候選者之一.
목적 구건중조결핵분지간균38 kD-16 kD융합단백,평개기재결핵병혈청학진단방면적개치.방법 통과취합매련반응확증획득16 kD화38 kD기인편단,분별련접도표체재체pET21a중,동시장2편단2차련접도표체재체pET21a중,형성38 kD-16 kD(3 816),16 kD,38 kD중조재체;경표체、순화화복성후,통과Western blot분석,이매련면역흡부시험검측184례혈청항체,폐결핵환자96례、비결핵폐부질병환자50례,정상대조38례.결과 성공구건중조질립pET21a-3816,표체단백경SDS-PAGE후현시상대분자질량약위65 kD,중조단백경얼주순화후,순도균체90 %이상;경 Western blotting 증실중조단백능여결핵병환자혈청반응;중조단백3816혈청검측,기민감성위80.2%(77/96),특이성위90.9%(80/88).결론 성공표체화순화료3816융합단백,기대혈청학검측증명중조융합단백유희망성위결핵병혈청학진단적유효후선자지일.
