中国防痨杂志
中國防癆雜誌
중국방로잡지
BULLETIN OF THE CHINESE ANTITUBERCULOSIS ASSOCIATION
2013年
1期
32-36
,共5页
卢锦标%杨蕾%付丽丽%陈保文%都伟欣%王国治%徐苗
盧錦標%楊蕾%付麗麗%陳保文%都偉訢%王國治%徐苗
로금표%양뢰%부려려%진보문%도위흔%왕국치%서묘
疫苗,亚单位%免疫,细胞%抗原,细菌%细菌蛋白质类%重组融合蛋白质类%小鼠
疫苗,亞單位%免疫,細胞%抗原,細菌%細菌蛋白質類%重組融閤蛋白質類%小鼠
역묘,아단위%면역,세포%항원,세균%세균단백질류%중조융합단백질류%소서
目的 动态评价结核亚单位候选疫苗AEC/BC-C02在小鼠中的细胞免疫应答水平.方法 6～8周龄SPF级BALB/c雌鼠48只,按数字表法随机分成两组,一组免疫AEC/BC-C02,另一组免疫PBS.末次免疫后第1、2、4、8周分别取两组小鼠(6只/组)分离脾淋巴细胞,ELISPOT检测分泌抗原特异性IFN-γ的T细胞频率；在第2、4、8周ELISA检测抗原特异性IFN-γ的分泌量；在第4、8周,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测脾淋巴细胞增殖.结果 (1)末次免疫后第1、2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B特异性的IFN-γ斑点形成细胞(spot forming cells,SFC)分别为168.8±103.5、205.2±51.0、206.8±65.3和160.0±67.9,与PBS对照组的8.9±6.0、16.1±18.8、9.3±4.9和7.7±6.6比较,差异均有统计学意义(成组t检验,t值分别为3.779、8.525、7.424、5.473;P值均＜0.01)；EC特异性的IFN-γ SFC分别为45.1±18.6、75.6±39.3、86.2±50.4和54.3±26.3,与PBS对照组的4.5±3.5、11.7±10.5、3.8±5.8和5.2±4.3比较,差异均有统计学意义(成组t检验,t值分别为5.258、3.850、3.977、4.521；P值均＜0.01).(2)末次免疫后第2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(1.27±0.13) ng/ml,(1.76±0.55) ng/ml和(1.44±0.44) ng/ml;EC多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(0.81±0.33) ng/ml,(0.81±0.69) ng/ml和(0.54±0.29) ng/ml,两者间差异有统计学意义(配对t检验,分别为:t=3.008,P＜0.05;t=2.631,P＜0.05;t=10.02,P＜0.01).(3)末次免疫后第4、8周,Ag85B多肽对疫苗组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数(SI)分别为1.756±0.339和1.936±0.287,均分别高于PBS组的1.287±0.0581和1.382±0.114,差异有统计学意义(成组t检验,分别为:t=3.030,P＜0.05;t=4.387,P＜0.01)；EC多肽对疫苗组SI分别为1.599±0.154和1.581±0.156,均分别高于PBS组的1.380±0.126和1.314±0.170,差异有统计学意义(成组f检验,t值分别为2.540、2.844;P值均＜0.05).结论 新型结核亚单位疫苗AEC/BC-C02免疫小鼠可诱导长期稳定存在的抗原特异性记忆T细胞,为后期抗Mtb保护力研究提供药理学基础.
目的 動態評價結覈亞單位候選疫苗AEC/BC-C02在小鼠中的細胞免疫應答水平.方法 6～8週齡SPF級BALB/c雌鼠48隻,按數字錶法隨機分成兩組,一組免疫AEC/BC-C02,另一組免疫PBS.末次免疫後第1、2、4、8週分彆取兩組小鼠(6隻/組)分離脾淋巴細胞,ELISPOT檢測分泌抗原特異性IFN-γ的T細胞頻率；在第2、4、8週ELISA檢測抗原特異性IFN-γ的分泌量；在第4、8週,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法檢測脾淋巴細胞增殖.結果 (1)末次免疫後第1、2、4、8週,對疫苗組小鼠脾淋巴細胞,Ag85B特異性的IFN-γ斑點形成細胞(spot forming cells,SFC)分彆為168.8±103.5、205.2±51.0、206.8±65.3和160.0±67.9,與PBS對照組的8.9±6.0、16.1±18.8、9.3±4.9和7.7±6.6比較,差異均有統計學意義(成組t檢驗,t值分彆為3.779、8.525、7.424、5.473;P值均＜0.01)；EC特異性的IFN-γ SFC分彆為45.1±18.6、75.6±39.3、86.2±50.4和54.3±26.3,與PBS對照組的4.5±3.5、11.7±10.5、3.8±5.8和5.2±4.3比較,差異均有統計學意義(成組t檢驗,t值分彆為5.258、3.850、3.977、4.521；P值均＜0.01).(2)末次免疫後第2、4、8週,對疫苗組小鼠脾淋巴細胞,Ag85B多肽刺激的IFN-γ分泌量分彆是(1.27±0.13) ng/ml,(1.76±0.55) ng/ml和(1.44±0.44) ng/ml;EC多肽刺激的IFN-γ分泌量分彆是(0.81±0.33) ng/ml,(0.81±0.69) ng/ml和(0.54±0.29) ng/ml,兩者間差異有統計學意義(配對t檢驗,分彆為:t=3.008,P＜0.05;t=2.631,P＜0.05;t=10.02,P＜0.01).(3)末次免疫後第4、8週,Ag85B多肽對疫苗組小鼠脾淋巴細胞的刺激指數(SI)分彆為1.756±0.339和1.936±0.287,均分彆高于PBS組的1.287±0.0581和1.382±0.114,差異有統計學意義(成組t檢驗,分彆為:t=3.030,P＜0.05;t=4.387,P＜0.01)；EC多肽對疫苗組SI分彆為1.599±0.154和1.581±0.156,均分彆高于PBS組的1.380±0.126和1.314±0.170,差異有統計學意義(成組f檢驗,t值分彆為2.540、2.844;P值均＜0.05).結論 新型結覈亞單位疫苗AEC/BC-C02免疫小鼠可誘導長期穩定存在的抗原特異性記憶T細胞,為後期抗Mtb保護力研究提供藥理學基礎.
목적 동태평개결핵아단위후선역묘AEC/BC-C02재소서중적세포면역응답수평.방법 6～8주령SPF급BALB/c자서48지,안수자표법수궤분성량조,일조면역AEC/BC-C02,령일조면역PBS.말차면역후제1、2、4、8주분별취량조소서(6지/조)분리비림파세포,ELISPOT검측분비항원특이성IFN-γ적T세포빈솔；재제2、4、8주ELISA검측항원특이성IFN-γ적분비량；재제4、8주,Cell Counting Kit-8(CCK-8)법검측비림파세포증식.결과 (1)말차면역후제1、2、4、8주,대역묘조소서비림파세포,Ag85B특이성적IFN-γ반점형성세포(spot forming cells,SFC)분별위168.8±103.5、205.2±51.0、206.8±65.3화160.0±67.9,여PBS대조조적8.9±6.0、16.1±18.8、9.3±4.9화7.7±6.6비교,차이균유통계학의의(성조t검험,t치분별위3.779、8.525、7.424、5.473;P치균＜0.01)；EC특이성적IFN-γ SFC분별위45.1±18.6、75.6±39.3、86.2±50.4화54.3±26.3,여PBS대조조적4.5±3.5、11.7±10.5、3.8±5.8화5.2±4.3비교,차이균유통계학의의(성조t검험,t치분별위5.258、3.850、3.977、4.521；P치균＜0.01).(2)말차면역후제2、4、8주,대역묘조소서비림파세포,Ag85B다태자격적IFN-γ분비량분별시(1.27±0.13) ng/ml,(1.76±0.55) ng/ml화(1.44±0.44) ng/ml;EC다태자격적IFN-γ분비량분별시(0.81±0.33) ng/ml,(0.81±0.69) ng/ml화(0.54±0.29) ng/ml,량자간차이유통계학의의(배대t검험,분별위:t=3.008,P＜0.05;t=2.631,P＜0.05;t=10.02,P＜0.01).(3)말차면역후제4、8주,Ag85B다태대역묘조소서비림파세포적자격지수(SI)분별위1.756±0.339화1.936±0.287,균분별고우PBS조적1.287±0.0581화1.382±0.114,차이유통계학의의(성조t검험,분별위:t=3.030,P＜0.05;t=4.387,P＜0.01)；EC다태대역묘조SI분별위1.599±0.154화1.581±0.156,균분별고우PBS조적1.380±0.126화1.314±0.170,차이유통계학의의(성조f검험,t치분별위2.540、2.844;P치균＜0.05).결론 신형결핵아단위역묘AEC/BC-C02면역소서가유도장기은정존재적항원특이성기억T세포,위후기항Mtb보호력연구제공약이학기출.
