中国防痨杂志
中國防癆雜誌
중국방로잡지
BULLETIN OF THE CHINESE ANTITUBERCULOSIS ASSOCIATION
2013年
3期
183-186
,共4页
罗影殊%高文凤%黄偌颖%刘衡川
囉影殊%高文鳳%黃偌穎%劉衡川
라영수%고문봉%황야영%류형천
分枝杆菌,结核%RNA,细菌%逆转录聚合酶链反应%细胞壁%细菌学技术
分枝桿菌,結覈%RNA,細菌%逆轉錄聚閤酶鏈反應%細胞壁%細菌學技術
분지간균,결핵%RNA,세균%역전록취합매련반응%세포벽%세균학기술
目的 建立简便有效的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)总RNA提取方法.方法 采用5种方法,分别为160、240和400 W超声波联合Trizol法(简称“160W超声法”、“240W超声法”和“400 W超声法”)、玻璃珠(简称“玻珠”)联合Trizol法(简称“玻珠法”)和Trizol法(简称“不加玻珠法”),对结核分枝杆菌标准株H37Rv进行破壁,提取总RNA.通过荧光定量逆转录PCR评价不同破壁方法对Mtb总RNA提取效果的影响,以灭菌超纯水代替模板为阴性对照.每种方法分别提取3份样本进行检测.最后结果为3份标本的平均值.结果 玻珠法检测组Ct值为20.67,△Rn值为0.644;400W超声法检测组Ct值为22.09,△Rn值为0.571;240W超声法检测组Ct值为21.86,△Rn值为0.503;160W超声法检测组Ct值为25.21,△Rn值为0.411;不加玻珠法检测组Ct值为28.40,△Rn值为0.299;阴性对照Ct值为40.00,△Rn值为0.000.结论 直观地从试验结果来看,玻珠法对结核分枝杆菌破壁效果好于超声法.
目的 建立簡便有效的結覈分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)總RNA提取方法.方法 採用5種方法,分彆為160、240和400 W超聲波聯閤Trizol法(簡稱“160W超聲法”、“240W超聲法”和“400 W超聲法”)、玻璃珠(簡稱“玻珠”)聯閤Trizol法(簡稱“玻珠法”)和Trizol法(簡稱“不加玻珠法”),對結覈分枝桿菌標準株H37Rv進行破壁,提取總RNA.通過熒光定量逆轉錄PCR評價不同破壁方法對Mtb總RNA提取效果的影響,以滅菌超純水代替模闆為陰性對照.每種方法分彆提取3份樣本進行檢測.最後結果為3份標本的平均值.結果 玻珠法檢測組Ct值為20.67,△Rn值為0.644;400W超聲法檢測組Ct值為22.09,△Rn值為0.571;240W超聲法檢測組Ct值為21.86,△Rn值為0.503;160W超聲法檢測組Ct值為25.21,△Rn值為0.411;不加玻珠法檢測組Ct值為28.40,△Rn值為0.299;陰性對照Ct值為40.00,△Rn值為0.000.結論 直觀地從試驗結果來看,玻珠法對結覈分枝桿菌破壁效果好于超聲法.
목적 건립간편유효적결핵분지간균(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)총RNA제취방법.방법 채용5충방법,분별위160、240화400 W초성파연합Trizol법(간칭“160W초성법”、“240W초성법”화“400 W초성법”)、파리주(간칭“파주”)연합Trizol법(간칭“파주법”)화Trizol법(간칭“불가파주법”),대결핵분지간균표준주H37Rv진행파벽,제취총RNA.통과형광정량역전록PCR평개불동파벽방법대Mtb총RNA제취효과적영향,이멸균초순수대체모판위음성대조.매충방법분별제취3빈양본진행검측.최후결과위3빈표본적평균치.결과 파주법검측조Ct치위20.67,△Rn치위0.644;400W초성법검측조Ct치위22.09,△Rn치위0.571;240W초성법검측조Ct치위21.86,△Rn치위0.503;160W초성법검측조Ct치위25.21,△Rn치위0.411;불가파주법검측조Ct치위28.40,△Rn치위0.299;음성대조Ct치위40.00,△Rn치위0.000.결론 직관지종시험결과래간,파주법대결핵분지간균파벽효과호우초성법.
