西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2013年
10期
1953-1957
,共5页
张秀%钟巧芳%付坚%李定琴%程在全
張秀%鐘巧芳%付堅%李定琴%程在全
장수%종교방%부견%리정금%정재전
二价表达载体%Pi-ta+基因%菜豆几丁质酶基因%稻瘟病
二價錶達載體%Pi-ta+基因%菜豆幾丁質酶基因%稻瘟病
이개표체재체%Pi-ta+기인%채두궤정질매기인%도온병
bivalent expression vector%Pi-ta + gene%bean chitinase gene%rice blast
为了提高‘云资粳41’和‘云资粳43’的抗稻瘟病能力,利用农杆菌介导法将二价表达载体pCAMBIA1300-Pi-ta+-Bchi转化到水稻愈伤组织中.经组织培养获得再生苗,再通过氯酚红显色法、PCR检测和抗稻瘟病鉴定法获得抗稻瘟病的转基因植株,为进一步创建持久、广谱抗稻瘟病水稻新材料奠定基础.结果显示:(1)抗性愈伤组织经分化和生根培养后,共获得T0代水稻再生苗137株,其中‘云资粳41'14株,‘中花11＇82株,‘云资粳43＇41株.(2)经氯酚红显色法和PCR对再生苗检测,‘中花11’、‘云资粳41’、‘云资粳43＇的转化苗阳性率分别为66％、43％和55％.证明2个外源基因已经整合到水稻基因组中.(3)对转化阳性植株温室接种稻瘟病病菌66b鉴定结果显示,转基因植株较非转基因植株对稻瘟病的抗性明显增强,而且转Pi-ta+基因和几丁质酶基因双价的水稻植株比转单价Pi-ta+基因或几丁质酶基因的水稻植株抗稻瘟病能力强.(4)氯酚红检测结果存在一定的假阳性,PCR检测结果更真实可靠,但氯酚红显色法方便、快速,结果观察直观,可对大量的转基因植株进行初步筛选.研究表明,转Pi-ta+基因和几丁质酶基因双价基因的水稻植株具有更高的抗稻瘟病能力.
為瞭提高‘雲資粳41’和‘雲資粳43’的抗稻瘟病能力,利用農桿菌介導法將二價錶達載體pCAMBIA1300-Pi-ta+-Bchi轉化到水稻愈傷組織中.經組織培養穫得再生苗,再通過氯酚紅顯色法、PCR檢測和抗稻瘟病鑒定法穫得抗稻瘟病的轉基因植株,為進一步創建持久、廣譜抗稻瘟病水稻新材料奠定基礎.結果顯示:(1)抗性愈傷組織經分化和生根培養後,共穫得T0代水稻再生苗137株,其中‘雲資粳41'14株,‘中花11＇82株,‘雲資粳43＇41株.(2)經氯酚紅顯色法和PCR對再生苗檢測,‘中花11’、‘雲資粳41’、‘雲資粳43＇的轉化苗暘性率分彆為66％、43％和55％.證明2箇外源基因已經整閤到水稻基因組中.(3)對轉化暘性植株溫室接種稻瘟病病菌66b鑒定結果顯示,轉基因植株較非轉基因植株對稻瘟病的抗性明顯增彊,而且轉Pi-ta+基因和幾丁質酶基因雙價的水稻植株比轉單價Pi-ta+基因或幾丁質酶基因的水稻植株抗稻瘟病能力彊.(4)氯酚紅檢測結果存在一定的假暘性,PCR檢測結果更真實可靠,但氯酚紅顯色法方便、快速,結果觀察直觀,可對大量的轉基因植株進行初步篩選.研究錶明,轉Pi-ta+基因和幾丁質酶基因雙價基因的水稻植株具有更高的抗稻瘟病能力.
위료제고‘운자갱41’화‘운자갱43’적항도온병능력,이용농간균개도법장이개표체재체pCAMBIA1300-Pi-ta+-Bchi전화도수도유상조직중.경조직배양획득재생묘,재통과록분홍현색법、PCR검측화항도온병감정법획득항도온병적전기인식주,위진일보창건지구、엄보항도온병수도신재료전정기출.결과현시:(1)항성유상조직경분화화생근배양후,공획득T0대수도재생묘137주,기중‘운자갱41'14주,‘중화11＇82주,‘운자갱43＇41주.(2)경록분홍현색법화PCR대재생묘검측,‘중화11’、‘운자갱41’、‘운자갱43＇적전화묘양성솔분별위66％、43％화55％.증명2개외원기인이경정합도수도기인조중.(3)대전화양성식주온실접충도온병병균66b감정결과현시,전기인식주교비전기인식주대도온병적항성명현증강,이차전Pi-ta+기인화궤정질매기인쌍개적수도식주비전단개Pi-ta+기인혹궤정질매기인적수도식주항도온병능력강.(4)록분홍검측결과존재일정적가양성,PCR검측결과경진실가고,단록분홍현색법방편、쾌속,결과관찰직관,가대대량적전기인식주진행초보사선.연구표명,전Pi-ta+기인화궤정질매기인쌍개기인적수도식주구유경고적항도온병능력.
