酿酒科技
釀酒科技
양주과기
LIQUOR-MAKING SCIENCE & TECHNOLOGY
2013年
10期
5-9
,共5页
卢君%吴德光%陈叶福%肖冬光
盧君%吳德光%陳葉福%肖鼕光
로군%오덕광%진협복%초동광
蛋白酶A%点突变%重叠延伸PCR%生长曲线
蛋白酶A%點突變%重疊延伸PCR%生長麯線
단백매A%점돌변%중첩연신PCR%생장곡선
proteinase A%point mutations%overlap extension PCR%growth curve
蛋白酶A由PEP4基因编码,对酿酒酵母的生理生化功能起到重要的作用,蛋白酶A缺失或低表达对于理论研究和实际应用都具有重要价值.利用重叠延伸法构建了蛋白酶A第294位活性中心突变的PEP4基因表达载体,同时构建了野生型PEP4基因表达载体,并分别将两种表达载体转化到基因背景为PEP4缺失的菌株中.研究发现,蛋白酶A活性中心点突变的重组菌株与蛋白酶A缺失的重组菌株在细胞内外均不能检测到蛋白酶A活力,而转化野生型表达载体的菌株蛋白酶A活力与出发菌株基本一致.结果表明,活性中心点突变与基因完全缺失对菌株的影响一致;通过生长曲线的观察发现蛋白酶A活性中心点突变会导致生长速率的减慢.本研究对于工业菌株无痕敲除、提高应用安全性方面具有理论指导意义.
蛋白酶A由PEP4基因編碼,對釀酒酵母的生理生化功能起到重要的作用,蛋白酶A缺失或低錶達對于理論研究和實際應用都具有重要價值.利用重疊延伸法構建瞭蛋白酶A第294位活性中心突變的PEP4基因錶達載體,同時構建瞭野生型PEP4基因錶達載體,併分彆將兩種錶達載體轉化到基因揹景為PEP4缺失的菌株中.研究髮現,蛋白酶A活性中心點突變的重組菌株與蛋白酶A缺失的重組菌株在細胞內外均不能檢測到蛋白酶A活力,而轉化野生型錶達載體的菌株蛋白酶A活力與齣髮菌株基本一緻.結果錶明,活性中心點突變與基因完全缺失對菌株的影響一緻;通過生長麯線的觀察髮現蛋白酶A活性中心點突變會導緻生長速率的減慢.本研究對于工業菌株無痕敲除、提高應用安全性方麵具有理論指導意義.
단백매A유PEP4기인편마,대양주효모적생리생화공능기도중요적작용,단백매A결실혹저표체대우이론연구화실제응용도구유중요개치.이용중첩연신법구건료단백매A제294위활성중심돌변적PEP4기인표체재체,동시구건료야생형PEP4기인표체재체,병분별장량충표체재체전화도기인배경위PEP4결실적균주중.연구발현,단백매A활성중심점돌변적중조균주여단백매A결실적중조균주재세포내외균불능검측도단백매A활력,이전화야생형표체재체적균주단백매A활력여출발균주기본일치.결과표명,활성중심점돌변여기인완전결실대균주적영향일치;통과생장곡선적관찰발현단백매A활성중심점돌변회도치생장속솔적감만.본연구대우공업균주무흔고제、제고응용안전성방면구유이론지도의의.
