中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2014年
2期
131-136
,共6页
张帅%刘宇思%王虹%王哲%王维%张雪梅
張帥%劉宇思%王虹%王哲%王維%張雪梅
장수%류우사%왕홍%왕철%왕유%장설매
肺炎链球菌%VicK蛋白%表达纯化%多克隆抗体%激酶活性%定位
肺炎鏈毬菌%VicK蛋白%錶達純化%多剋隆抗體%激酶活性%定位
폐염련구균%VicK단백%표체순화%다극륭항체%격매활성%정위
Streptococcus pneumoniae%Histidine kinase%Purification%Polyclonal antibody%Enzymatic activity%Subcellular localization
目的 全长表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)VicK蛋白并制备其多克隆抗体,对其进行保守性分析和亚细胞定位,为其作为抗菌药物筛选靶点提供实验依据.方法 利用分子生物学技术构建pET-28a(+)-vicK原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达,经Ni-NTA亲和纯化后,通过试剂盒检测其激酶活性.将纯化的VicK蛋白免疫Balb/C小鼠,并用ELISA和Western blot方法分别检测其多克隆抗体的效价及特异性.采用流式细胞术对VicK蛋白进行表面定位分析.结果 成功获得VicK全长蛋白,酶活性检测结果提示具有ATP激酶活性.VicK蛋白免疫小鼠获得效价达1:125000以上的多克隆抗体.Western Blot结果显示其能特异地识别1型、2型、3型、4型、6B及19F型S.pn中的VicK蛋白.流式结果表明VicK蛋白主要位于胞内.结论 获得具有ATP激酶活性的S.pn VicK全长蛋白,且该蛋白保守表达于S.pn胞内.
目的 全長錶達肺炎鏈毬菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)VicK蛋白併製備其多剋隆抗體,對其進行保守性分析和亞細胞定位,為其作為抗菌藥物篩選靶點提供實驗依據.方法 利用分子生物學技術構建pET-28a(+)-vicK原覈錶達質粒,併在大腸埃希菌BL21(DE3)中進行錶達,經Ni-NTA親和純化後,通過試劑盒檢測其激酶活性.將純化的VicK蛋白免疫Balb/C小鼠,併用ELISA和Western blot方法分彆檢測其多剋隆抗體的效價及特異性.採用流式細胞術對VicK蛋白進行錶麵定位分析.結果 成功穫得VicK全長蛋白,酶活性檢測結果提示具有ATP激酶活性.VicK蛋白免疫小鼠穫得效價達1:125000以上的多剋隆抗體.Western Blot結果顯示其能特異地識彆1型、2型、3型、4型、6B及19F型S.pn中的VicK蛋白.流式結果錶明VicK蛋白主要位于胞內.結論 穫得具有ATP激酶活性的S.pn VicK全長蛋白,且該蛋白保守錶達于S.pn胞內.
목적 전장표체폐염련구균(Streptococcus pneumoniae,S.pn)VicK단백병제비기다극륭항체,대기진행보수성분석화아세포정위,위기작위항균약물사선파점제공실험의거.방법 이용분자생물학기술구건pET-28a(+)-vicK원핵표체질립,병재대장애희균BL21(DE3)중진행표체,경Ni-NTA친화순화후,통과시제합검측기격매활성.장순화적VicK단백면역Balb/C소서,병용ELISA화Western blot방법분별검측기다극륭항체적효개급특이성.채용류식세포술대VicK단백진행표면정위분석.결과 성공획득VicK전장단백,매활성검측결과제시구유ATP격매활성.VicK단백면역소서획득효개체1:125000이상적다극륭항체.Western Blot결과현시기능특이지식별1형、2형、3형、4형、6B급19F형S.pn중적VicK단백.류식결과표명VicK단백주요위우포내.결론 획득구유ATP격매활성적S.pn VicK전장단백,차해단백보수표체우S.pn포내.
