CAJ | 학술논문

[目的]建立可同时检测鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)与鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)的二重RT-PCR,为有效防控DTMUV与DPV提供技术支撑.[方法]根据GenBank中DTMUVE基因和DPVUL6基因的保守序列,设计合成两对引物,优化反应体系条件,并通过特异性、敏感性试验评价建立的二重RT-PCR.[结果l优化后的二重RT-PCR反应体系为:2×PCR Mix 12.5 μL,其中DTMUV上、下引物各0.5 μL,DPV上、下引物各0.5 μL,混合模板2.0 μL,ddH2O补足至25.0 μL;最佳反应程序:95℃预变性5 min;95℃1 min,54.4℃l min,72℃1 min,进行35个循环;72℃延伸10 min.该方法对DTMUV与DPV的检测敏感性分别达500和600 fg,但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感.[结论]建立的二重RT-PCR可用于DTMUV与DPV感染的快速鉴别诊断.
[목적]건립가동시검측압탄포소병독(Duck tembusu virus,DTMUV)여압온병독(Duck plague virus,DPV)적이중RT-PCR,위유효방공DTMUV여DPV제공기술지탱.[방법]근거GenBank중DTMUVE기인화DPVUL6기인적보수서렬,설계합성량대인물,우화반응체계조건,병통과특이성、민감성시험평개건립적이중RT-PCR.[결과l우화후적이중RT-PCR반응체계위:2×PCR Mix 12.5 μL,기중DTMUV상、하인물각0.5 μL,DPV상、하인물각0.5 μL,혼합모판2.0 μL,ddH2O보족지25.0 μL;최가반응정서:95℃예변성5 min;95℃1 min,54.4℃l min,72℃1 min,진행35개순배;72℃연신10 min.해방법대DTMUV여DPV적검측민감성분별체500화600 fg,단대압원신성역병독、압간염병독、번압세소병독、압원배병독、H9아형금류감병독화감단종합증병독등병원체불민감.[결론]건립적이중RT-PCR가용우DTMUV여DPV감염적쾌속감별진단.