中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2014年
5期
842-846
,共5页
舒晓明%逯丹%王珍%张婵娟%赵佳仪%朱丽红%戚仁斌%陆大祥
舒曉明%逯丹%王珍%張嬋娟%趙佳儀%硃麗紅%慼仁斌%陸大祥
서효명%록단%왕진%장선연%조가의%주려홍%척인빈%륙대상
质粒%转染%热休克蛋白70%神经干细胞
質粒%轉染%熱休剋蛋白70%神經榦細胞
질립%전염%열휴극단백70%신경간세포
Plasmid%Transfection%Heat-shock protein 70%Neural stem cells
目的:构建重组pEGFP-HSP70质粒并观察其在神经干细胞中的表达.方法:采用RT-PCR方法从SD胎鼠肝组织中获取总RNA,扩增出热休克蛋白70(HSP70)基因的全序列cDNA,并克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达载体pEGFP-C2上,经EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ酶切及测序分析对重组质粒pEGFP-HSP70进行鉴定.采用Nucleofector转染技术将重组质粒pEGFP-HSP70转染至胎鼠神经干细胞中.结果:(1)胎鼠HSP70cDNA序列被正确地克隆到真核表达载体pEGFP-C2中,成功构建重组大鼠pEGFP-HSP70质粒.荧光强度检测空质粒转染组(pEGFP-C2组)、pEGFP-HSP70组与对照组相比显著升高(P＜0.01);pEGFP-HSP70组内24h的荧光强度与7 d(P ＜0.05)、14 d(P ＜0.05)和21 d(P＜0.01)相比降低明显.(2)转染后HSP70的表达在1d(P＜0.05)、7 d(P＜0.01)和14 d(P ＜0.01)与对照组相比均明显升高.结论:神经干细胞可直接作为基因靶细胞,能有效地表达重组质粒pEGFP-HSP70,且HSP70在神经干细胞中的表达与转染时间密切相关.
目的:構建重組pEGFP-HSP70質粒併觀察其在神經榦細胞中的錶達.方法:採用RT-PCR方法從SD胎鼠肝組織中穫取總RNA,擴增齣熱休剋蛋白70(HSP70)基因的全序列cDNA,併剋隆到含有增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的真覈錶達載體pEGFP-C2上,經EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ酶切及測序分析對重組質粒pEGFP-HSP70進行鑒定.採用Nucleofector轉染技術將重組質粒pEGFP-HSP70轉染至胎鼠神經榦細胞中.結果:(1)胎鼠HSP70cDNA序列被正確地剋隆到真覈錶達載體pEGFP-C2中,成功構建重組大鼠pEGFP-HSP70質粒.熒光彊度檢測空質粒轉染組(pEGFP-C2組)、pEGFP-HSP70組與對照組相比顯著升高(P＜0.01);pEGFP-HSP70組內24h的熒光彊度與7 d(P ＜0.05)、14 d(P ＜0.05)和21 d(P＜0.01)相比降低明顯.(2)轉染後HSP70的錶達在1d(P＜0.05)、7 d(P＜0.01)和14 d(P ＜0.01)與對照組相比均明顯升高.結論:神經榦細胞可直接作為基因靶細胞,能有效地錶達重組質粒pEGFP-HSP70,且HSP70在神經榦細胞中的錶達與轉染時間密切相關.
목적:구건중조pEGFP-HSP70질립병관찰기재신경간세포중적표체.방법:채용RT-PCR방법종SD태서간조직중획취총RNA,확증출열휴극단백70(HSP70)기인적전서렬cDNA,병극륭도함유증강형록색형광단백(EGFP)기인적진핵표체재체pEGFP-C2상,경EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ매절급측서분석대중조질립pEGFP-HSP70진행감정.채용Nucleofector전염기술장중조질립pEGFP-HSP70전염지태서신경간세포중.결과:(1)태서HSP70cDNA서렬피정학지극륭도진핵표체재체pEGFP-C2중,성공구건중조대서pEGFP-HSP70질립.형광강도검측공질립전염조(pEGFP-C2조)、pEGFP-HSP70조여대조조상비현저승고(P＜0.01);pEGFP-HSP70조내24h적형광강도여7 d(P ＜0.05)、14 d(P ＜0.05)화21 d(P＜0.01)상비강저명현.(2)전염후HSP70적표체재1d(P＜0.05)、7 d(P＜0.01)화14 d(P ＜0.01)여대조조상비균명현승고.결론:신경간세포가직접작위기인파세포,능유효지표체중조질립pEGFP-HSP70,차HSP70재신경간세포중적표체여전염시간밀절상관.
