CAJ | 학술논문

为了探索通用型植物表达载体的快捷构建,本研究通过PCR克隆、酶切连接和PCR扩增获得CaMV 35S启动子序列及pUC19多克隆位点部分限制性内切酶位点和NOS终止子,构建成完整的表达组件,并将该组件插入pCAMBIA 1300的多克隆位点,构建成通用型植物表达载体pCamE (GenBank登录号:JX841315).pCamE表达组件的启动子上游、多克隆位点和终止子下游分别含有4、8和3个单拷贝限制性内切酶位点,利于外源基因的克隆和插入以及对载体启动子或终止子的修饰和更换.以绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,eGFP)为报告基因,分别构建了表达载体pCam∷GFP、pCam∷SalGFP和pCam∷DAHPS-GFP,转化洋葱(Allium cepa L.)表皮细胞和拟南芥(Arabidopsis thaliana L.),绿色荧光蛋白(GFP)和融合蛋白DAHPS-GFP在洋葱表皮细胞中均成功稳定表达;在pCam∷GFP转基因拟南芥株系的根、根尖、根毛、茎表皮毛、幼叶基部、叶柄微管组织和未成熟花药等组织均能观察到强烈的绿色荧光.表明,植物表达载体pCamE是可将不同目的基因与植物染色体整合并稳定遗传的通用型植物表达载体,不受外源片段大小及插入位点的影响,具有经济实用、适用广泛、操作简便和外源基因在转基因植物中遗传稳定且正常表达等特点.该载体可用于不同基因和不同功能表达载体的快捷构建,为植物的遗传转化和基因功能研究提供了新的通用型基因表达载体工具.
위료탐색통용형식물표체재체적쾌첩구건,본연구통과PCR극륭、매절련접화PCR확증획득CaMV 35S계동자서렬급pUC19다극륭위점부분한제성내절매위점화NOS종지자,구건성완정적표체조건,병장해조건삽입pCAMBIA 1300적다극륭위점,구건성통용형식물표체재체pCamE (GenBank등록호:JX841315).pCamE표체조건적계동자상유、다극륭위점화종지자하유분별함유4、8화3개단고패한제성내절매위점,리우외원기인적극륭화삽입이급대재체계동자혹종지자적수식화경환.이록색형광단백기인(enhanced green fluorescent protein,eGFP)위보고기인,분별구건료표체재체pCam∷GFP、pCam∷SalGFP화pCam∷DAHPS-GFP,전화양총(Allium cepa L.)표피세포화의남개(Arabidopsis thaliana L.),록색형광단백(GFP)화융합단백DAHPS-GFP재양총표피세포중균성공은정표체;재pCam∷GFP전기인의남개주계적근、근첨、근모、경표피모、유협기부、협병미관조직화미성숙화약등조직균능관찰도강렬적록색형광.표명,식물표체재체pCamE시가장불동목적기인여식물염색체정합병은정유전적통용형식물표체재체,불수외원편단대소급삽입위점적영향,구유경제실용、괄용엄범、조작간편화외원기인재전기인식물중유전은정차정상표체등특점.해재체가용우불동기인화불동공능표체재체적쾌첩구건,위식물적유전전화화기인공능연구제공료신적통용형기인표체재체공구.