水产科学
水產科學
수산과학
FISHERIES SCIENCE
2013年
4期
219-223
,共5页
王璐%梁利国%谢骏%徐跑%夏飞
王璐%樑利國%謝駿%徐跑%夏飛
왕로%량리국%사준%서포%하비
嗜水气单胞菌%双重PCR%快速检测%气溶素基因%细胞兴奋性肠毒素基因
嗜水氣單胞菌%雙重PCR%快速檢測%氣溶素基因%細胞興奮性腸毒素基因
기수기단포균%쌍중PCR%쾌속검측%기용소기인%세포흥강성장독소기인
根据GenBank收录的细胞兴奋性肠毒素(alt)基因和气溶素结构基因(aerA),依据嗜水气单胞菌保守序列分别设计能检测alt和aerA基因的特异性引物,并进行PCR反应体系和反应条件的优化.建立了一种快速检测嗜水气单胞菌双重PCR方法.结果显示,在同一PCR反应体系中,供试菌株嗜水气单胞菌扩增2条目的带,扩增产物的片段大小分别为200 bp和280 bp,而对照菌株温和气单胞菌、杀鲑气单胞菌、豚鼠气单胞菌、河流弧菌的PCR扩增则无条带检出.敏感性试验结果显示,该双重PCR最低能检测3×104 cfu/mL菌体密度的嗜水气单胞菌,对嗜水气单胞菌模板DNA的检出极限为49 fg/μL;同时对送检的患病水产品进行抽检,检测出阳性结果的样品均可分离到优势生长的嗜水气单胞菌.结果证实,试验所建立的基于2种基因的双重PCR方法快捷、灵敏,为今后由于该菌所引起的水产动物疾病的检测提供了参考依据.
根據GenBank收錄的細胞興奮性腸毒素(alt)基因和氣溶素結構基因(aerA),依據嗜水氣單胞菌保守序列分彆設計能檢測alt和aerA基因的特異性引物,併進行PCR反應體繫和反應條件的優化.建立瞭一種快速檢測嗜水氣單胞菌雙重PCR方法.結果顯示,在同一PCR反應體繫中,供試菌株嗜水氣單胞菌擴增2條目的帶,擴增產物的片段大小分彆為200 bp和280 bp,而對照菌株溫和氣單胞菌、殺鮭氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌、河流弧菌的PCR擴增則無條帶檢齣.敏感性試驗結果顯示,該雙重PCR最低能檢測3×104 cfu/mL菌體密度的嗜水氣單胞菌,對嗜水氣單胞菌模闆DNA的檢齣極限為49 fg/μL;同時對送檢的患病水產品進行抽檢,檢測齣暘性結果的樣品均可分離到優勢生長的嗜水氣單胞菌.結果證實,試驗所建立的基于2種基因的雙重PCR方法快捷、靈敏,為今後由于該菌所引起的水產動物疾病的檢測提供瞭參攷依據.
근거GenBank수록적세포흥강성장독소(alt)기인화기용소결구기인(aerA),의거기수기단포균보수서렬분별설계능검측alt화aerA기인적특이성인물,병진행PCR반응체계화반응조건적우화.건립료일충쾌속검측기수기단포균쌍중PCR방법.결과현시,재동일PCR반응체계중,공시균주기수기단포균확증2조목적대,확증산물적편단대소분별위200 bp화280 bp,이대조균주온화기단포균、살해기단포균、돈서기단포균、하류호균적PCR확증칙무조대검출.민감성시험결과현시,해쌍중PCR최저능검측3×104 cfu/mL균체밀도적기수기단포균,대기수기단포균모판DNA적검출겁한위49 fg/μL;동시대송검적환병수산품진행추검,검측출양성결과적양품균가분리도우세생장적기수기단포균.결과증실,시험소건립적기우2충기인적쌍중PCR방법쾌첩、령민,위금후유우해균소인기적수산동물질병적검측제공료삼고의거.