实用医学杂志
實用醫學雜誌
실용의학잡지
THE JOURNAL OF PRACTICAL MEDICINE
2013年
20期
3304-3306
,共3页
刘璇%肖强%吴砂%蒋小滔
劉璇%肖彊%吳砂%蔣小滔
류선%초강%오사%장소도
乙肝表面抗原%真核表达%转基因鼠%绿色荧光蛋白
乙肝錶麵抗原%真覈錶達%轉基因鼠%綠色熒光蛋白
을간표면항원%진핵표체%전기인서%록색형광단백
目的:构建pCMV-HBsAg-GFP真核表达载体,鉴定重组蛋白在293T细胞中的表达及抗原性.方法:以HBV转基因鼠C57BL/6J-TgN(AlblHBV)44Bri基因组DNA为模板扩增HBsAg基因片段,并将其插入到带绿色荧光蛋白标签的真核表达载体pCMV-AC-GFP.通过阳离子聚合物将重组质粒pCMV-HBsAg-GFP转入293T细胞,荧光显微镜观察重组蛋白的表达,ELISA和Western Blotting鉴定其抗原性.结果:1％琼脂糖凝胶电泳结果显示,PCR扩增片段大小符合HBsAg基因699 bp的理论值.重组质粒经PCR、酶切鉴定后也与理论值相符.荧光显微镜显示,转染293T细胞48 h后,约50％呈亮绿色,细胞形态好,荧光表达强度高.ELISA和Western Blotting鉴定结果均为阳性.结论:成功构建了pCMV-HBsAg-GFP真核表达质粒,其表达的重组蛋白与天然HBsAg具有相同的抗原性.
目的:構建pCMV-HBsAg-GFP真覈錶達載體,鑒定重組蛋白在293T細胞中的錶達及抗原性.方法:以HBV轉基因鼠C57BL/6J-TgN(AlblHBV)44Bri基因組DNA為模闆擴增HBsAg基因片段,併將其插入到帶綠色熒光蛋白標籤的真覈錶達載體pCMV-AC-GFP.通過暘離子聚閤物將重組質粒pCMV-HBsAg-GFP轉入293T細胞,熒光顯微鏡觀察重組蛋白的錶達,ELISA和Western Blotting鑒定其抗原性.結果:1％瓊脂糖凝膠電泳結果顯示,PCR擴增片段大小符閤HBsAg基因699 bp的理論值.重組質粒經PCR、酶切鑒定後也與理論值相符.熒光顯微鏡顯示,轉染293T細胞48 h後,約50％呈亮綠色,細胞形態好,熒光錶達彊度高.ELISA和Western Blotting鑒定結果均為暘性.結論:成功構建瞭pCMV-HBsAg-GFP真覈錶達質粒,其錶達的重組蛋白與天然HBsAg具有相同的抗原性.
목적:구건pCMV-HBsAg-GFP진핵표체재체,감정중조단백재293T세포중적표체급항원성.방법:이HBV전기인서C57BL/6J-TgN(AlblHBV)44Bri기인조DNA위모판확증HBsAg기인편단,병장기삽입도대록색형광단백표첨적진핵표체재체pCMV-AC-GFP.통과양리자취합물장중조질립pCMV-HBsAg-GFP전입293T세포,형광현미경관찰중조단백적표체,ELISA화Western Blotting감정기항원성.결과:1％경지당응효전영결과현시,PCR확증편단대소부합HBsAg기인699 bp적이론치.중조질립경PCR、매절감정후야여이론치상부.형광현미경현시,전염293T세포48 h후,약50％정량록색,세포형태호,형광표체강도고.ELISA화Western Blotting감정결과균위양성.결론:성공구건료pCMV-HBsAg-GFP진핵표체질립,기표체적중조단백여천연HBsAg구유상동적항원성.
