四川理工学院学报（自然科学版）
四川理工學院學報（自然科學版）
사천리공학원학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY OF SCIENCE & ENGINEERING(NATURAL SCIENCE EDITION)
2014年
3期
15-19
,共5页
李丙超%李再新%胡卫东%黄永生%唐文才%张智
李丙超%李再新%鬍衛東%黃永生%唐文纔%張智
리병초%리재신%호위동%황영생%당문재%장지
人A组轮状病毒%VP7%原核表达%包涵体%免疫%卵黄抗体
人A組輪狀病毒%VP7%原覈錶達%包涵體%免疫%卵黃抗體
인A조륜상병독%VP7%원핵표체%포함체%면역%란황항체
为获得人A组轮状病毒重组结构蛋白VP7及其高效价的卵黄抗体,使用PCR技术扩增VP7 DNA片段并将其克隆到原核表达载体pET28a上形成重组质粒pET28a-VP7.将重组质粒转化基因工程菌E.Coil BL21 (DE3),用0.5 mM IPTG诱导VP7重组蛋白的表达.通过包涵体纯化和蛋白复性后,将VP7重组蛋白与弗氏佐剂混匀免疫产蛋鸡,收集鸡蛋.用水稀释-盐析法纯化卵黄抗体IgY.进一步应用SDS-PAGE、ELISA和点杂交技术,分析该卵黄抗体的纯度、效价和特异性.结果表明在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中能够实现VP7重组抗原的表达,将重组抗原VP7免疫产蛋鸡,提取纯化得到滴度为1∶100 000的抗VP7卵黄抗体,且特异性的识别野生型A组轮状病毒.
為穫得人A組輪狀病毒重組結構蛋白VP7及其高效價的卵黃抗體,使用PCR技術擴增VP7 DNA片段併將其剋隆到原覈錶達載體pET28a上形成重組質粒pET28a-VP7.將重組質粒轉化基因工程菌E.Coil BL21 (DE3),用0.5 mM IPTG誘導VP7重組蛋白的錶達.通過包涵體純化和蛋白複性後,將VP7重組蛋白與弗氏佐劑混勻免疫產蛋鷄,收集鷄蛋.用水稀釋-鹽析法純化卵黃抗體IgY.進一步應用SDS-PAGE、ELISA和點雜交技術,分析該卵黃抗體的純度、效價和特異性.結果錶明在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中能夠實現VP7重組抗原的錶達,將重組抗原VP7免疫產蛋鷄,提取純化得到滴度為1∶100 000的抗VP7卵黃抗體,且特異性的識彆野生型A組輪狀病毒.
위획득인A조륜상병독중조결구단백VP7급기고효개적란황항체,사용PCR기술확증VP7 DNA편단병장기극륭도원핵표체재체pET28a상형성중조질립pET28a-VP7.장중조질립전화기인공정균E.Coil BL21 (DE3),용0.5 mM IPTG유도VP7중조단백적표체.통과포함체순화화단백복성후,장VP7중조단백여불씨좌제혼균면역산단계,수집계단.용수희석-염석법순화란황항체IgY.진일보응용SDS-PAGE、ELISA화점잡교기술,분석해란황항체적순도、효개화특이성.결과표명재기인공정균E.coli BL21(DE3)중능구실현VP7중조항원적표체,장중조항원VP7면역산단계,제취순화득도적도위1∶100 000적항VP7란황항체,차특이성적식별야생형A조륜상병독.
