激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2013年
4期
379-384
,共6页
李天丽%郑晨华%李利君%倪辉%蔡慧农
李天麗%鄭晨華%李利君%倪輝%蔡慧農
리천려%정신화%리리군%예휘%채혜농
实时定量PCR%法夫酵母%标准质粒%标准曲线
實時定量PCR%法伕酵母%標準質粒%標準麯線
실시정량PCR%법부효모%표준질립%표준곡선
Real-time quantitative PCR%Phaffia rhodozyma%Standard plasmid%Standard curve
为建立检测法夫酵母JMU-MVP14中虾青素合成相关基因在不同生长时期表达水平的实时定量PCR方法,构建法夫酵母JMU-MVP14的管家基因β-actin、gpd、18S rRNA的标准质粒,进行实时定量PCR,制作标准曲线及回归方程.β-actin基因标准曲线相关系数(R2)=0.9956,扩增效率(E) =96.93％;gpd基因标准曲线相关系数(R2) =0.9901,扩增效率(E) =93.78％;18S rRNA基因标准曲线相关系数(R2) =0.9981,扩增效率(E)=98.76％.3个基因片段的熔解曲线均呈单峰;扩增曲线呈典型的S型动力学曲线,指数期和平台期明显,为理想的熔解曲线和扩增曲线.用geNorm软件对三个管家基因的稳定性进行分析,三个基因的稳定性排序为β-actin＞ 18S rRNA＞ gpd,故β-actin和18S rRNA较适合作为研究法夫酵母JMU-MVP14定量实验的内参基因.
為建立檢測法伕酵母JMU-MVP14中蝦青素閤成相關基因在不同生長時期錶達水平的實時定量PCR方法,構建法伕酵母JMU-MVP14的管傢基因β-actin、gpd、18S rRNA的標準質粒,進行實時定量PCR,製作標準麯線及迴歸方程.β-actin基因標準麯線相關繫數(R2)=0.9956,擴增效率(E) =96.93％;gpd基因標準麯線相關繫數(R2) =0.9901,擴增效率(E) =93.78％;18S rRNA基因標準麯線相關繫數(R2) =0.9981,擴增效率(E)=98.76％.3箇基因片段的鎔解麯線均呈單峰;擴增麯線呈典型的S型動力學麯線,指數期和平檯期明顯,為理想的鎔解麯線和擴增麯線.用geNorm軟件對三箇管傢基因的穩定性進行分析,三箇基因的穩定性排序為β-actin＞ 18S rRNA＞ gpd,故β-actin和18S rRNA較適閤作為研究法伕酵母JMU-MVP14定量實驗的內參基因.
위건립검측법부효모JMU-MVP14중하청소합성상관기인재불동생장시기표체수평적실시정량PCR방법,구건법부효모JMU-MVP14적관가기인β-actin、gpd、18S rRNA적표준질립,진행실시정량PCR,제작표준곡선급회귀방정.β-actin기인표준곡선상관계수(R2)=0.9956,확증효솔(E) =96.93％;gpd기인표준곡선상관계수(R2) =0.9901,확증효솔(E) =93.78％;18S rRNA기인표준곡선상관계수(R2) =0.9981,확증효솔(E)=98.76％.3개기인편단적용해곡선균정단봉;확증곡선정전형적S형동역학곡선,지수기화평태기명현,위이상적용해곡선화확증곡선.용geNorm연건대삼개관가기인적은정성진행분석,삼개기인적은정성배서위β-actin＞ 18S rRNA＞ gpd,고β-actin화18S rRNA교괄합작위연구법부효모JMU-MVP14정량실험적내삼기인.
