岭南心血管病杂志
嶺南心血管病雜誌
령남심혈관병잡지
SOUTH CHINA JOURNAL OF CARDIOLOGY
2013年
6期
717-721
,共5页
Caveolin-1%HERG钾通道%免疫共沉淀%免疫荧光细胞化学
Caveolin-1%HERG鉀通道%免疫共沉澱%免疫熒光細胞化學
Caveolin-1%HERG갑통도%면역공침정%면역형광세포화학
Caveolin-1%HERG potassium channel%co-immunoprecipitation%immunofluorescence cytochemistry
目的 验证Caveolin-1蛋白与HERG钾通道是否存在相互作用,并进一步明确发生相互作用的区域.方法 (1)将携带不同Caveolin-l片段的pGADT7载体转染Y187,随后分别与转化有pGBKT7-herg-NT或pGBKT7-hergCT的AH109进行酵母双杂交;(2)应用免疫共沉淀技术验证Caveolin-1与HERG之间的相互作用;(3)免疫荧光细胞化学分析:pcDNA3.1-HERG和pcDNA3.0-Caveolin-1质粒共转染HEK293细胞,应用特异性抗体和荧光标记二抗显示Caveolin-1及HERG的亚细胞定位,应用激光共聚焦显微镜观察.结果 (1)酵母双杂交发现,Caveolin-1与HERG氨基端相互作用,且其寡聚化结构域是必需片段,而Caveolin-1羧基端则与HERG羧基端相互作用;(2)抗Caveolin-1的抗体能够从心肌裂解物中沉淀HERG通道蛋白;(3)Caveolin-1蛋白和HERG通道共定位于细胞膜上.结论 Caveolin-1与心脏HERG钾通道存在相互作用,Caveolin-1的寡聚化结构域是HERG氨基片段的相互作用区域,而HERG羧基片段则与Caveolin-1的羧基端相互作用.
目的 驗證Caveolin-1蛋白與HERG鉀通道是否存在相互作用,併進一步明確髮生相互作用的區域.方法 (1)將攜帶不同Caveolin-l片段的pGADT7載體轉染Y187,隨後分彆與轉化有pGBKT7-herg-NT或pGBKT7-hergCT的AH109進行酵母雙雜交;(2)應用免疫共沉澱技術驗證Caveolin-1與HERG之間的相互作用;(3)免疫熒光細胞化學分析:pcDNA3.1-HERG和pcDNA3.0-Caveolin-1質粒共轉染HEK293細胞,應用特異性抗體和熒光標記二抗顯示Caveolin-1及HERG的亞細胞定位,應用激光共聚焦顯微鏡觀察.結果 (1)酵母雙雜交髮現,Caveolin-1與HERG氨基耑相互作用,且其寡聚化結構域是必需片段,而Caveolin-1羧基耑則與HERG羧基耑相互作用;(2)抗Caveolin-1的抗體能夠從心肌裂解物中沉澱HERG通道蛋白;(3)Caveolin-1蛋白和HERG通道共定位于細胞膜上.結論 Caveolin-1與心髒HERG鉀通道存在相互作用,Caveolin-1的寡聚化結構域是HERG氨基片段的相互作用區域,而HERG羧基片段則與Caveolin-1的羧基耑相互作用.
목적 험증Caveolin-1단백여HERG갑통도시부존재상호작용,병진일보명학발생상호작용적구역.방법 (1)장휴대불동Caveolin-l편단적pGADT7재체전염Y187,수후분별여전화유pGBKT7-herg-NT혹pGBKT7-hergCT적AH109진행효모쌍잡교;(2)응용면역공침정기술험증Caveolin-1여HERG지간적상호작용;(3)면역형광세포화학분석:pcDNA3.1-HERG화pcDNA3.0-Caveolin-1질립공전염HEK293세포,응용특이성항체화형광표기이항현시Caveolin-1급HERG적아세포정위,응용격광공취초현미경관찰.결과 (1)효모쌍잡교발현,Caveolin-1여HERG안기단상호작용,차기과취화결구역시필수편단,이Caveolin-1최기단칙여HERG최기단상호작용;(2)항Caveolin-1적항체능구종심기렬해물중침정HERG통도단백;(3)Caveolin-1단백화HERG통도공정위우세포막상.결론 Caveolin-1여심장HERG갑통도존재상호작용,Caveolin-1적과취화결구역시HERG안기편단적상호작용구역,이HERG최기편단칙여Caveolin-1적최기단상호작용.
