CAJ | 학술논문

通过构建瘤胃宏基因组文库并筛选新的有效降解粗纤维的纤维素酶基因,从而找到提高纤维物质降解的有效途径,本研究从山羊(Capra hircus)瘤胃中提取微生物DNA,成功构建了一个含有12 100个克隆的瘤胃未培养微生物宏基因组文库,对文库进行活性筛选获得了10个表达β-葡萄糖苷酶活性的克隆,并对其中一个表达强β-葡萄糖苷酶活性的pET-6进行亚克隆,序列分析发现了一个全长为1 836 bp的ORF,编码一个可能的β-葡萄糖苷酶umcel 6X基因,其编码产物和来自Dictyoglomus thermophilumH-6-12的一种β-葡萄糖苷酶具有55％的同源性,65％的相似性.将umcel 6X基因导入到大肠杆菌(Escherichia coli)中经IPTG诱导表达,表达产物Umcel 6X的分子量与预测大小相似.酶谱分析表明Umcel 6X具有β-葡萄糖苷酶活性,证实umcel 6X基因为一个β-葡萄糖苷酶基因.进一步经Ni-NTA纯化Umcel 6X并测定其酶学特性,结果表明,其最适pH和最适温度分别为7.5和50℃.Ca2+、Na+和Mg2+能显著提高该酶的酶活,Cu2+、Fe2+和Hg+明显抑制酶的活性.在pH5.5和35℃条件下,Umcel 6X经过Ni-NTA柱纯化的酶液比活力为33.6 IU/mg.本研究经瘤胃中获得的纤维素酶基因可为体外研究降解粗纤维提供材料.
통과구건류위굉기인조문고병사선신적유효강해조섬유적섬유소매기인,종이조도제고섬유물질강해적유효도경,본연구종산양(Capra hircus)류위중제취미생물DNA,성공구건료일개함유12 100개극륭적류위미배양미생물굉기인조문고,대문고진행활성사선획득료10개표체β-포도당감매활성적극륭,병대기중일개표체강β-포도당감매활성적pET-6진행아극륭,서렬분석발현료일개전장위1 836 bp적ORF,편마일개가능적β-포도당감매umcel 6X기인,기편마산물화래자Dictyoglomus thermophilumH-6-12적일충β-포도당감매구유55％적동원성,65％적상사성.장umcel 6X기인도입도대장간균(Escherichia coli)중경IPTG유도표체,표체산물Umcel 6X적분자량여예측대소상사.매보분석표명Umcel 6X구유β-포도당감매활성,증실umcel 6X기인위일개β-포도당감매기인.진일보경Ni-NTA순화Umcel 6X병측정기매학특성,결과표명,기최괄pH화최괄온도분별위7.5화50℃.Ca2+、Na+화Mg2+능현저제고해매적매활,Cu2+、Fe2+화Hg+명현억제매적활성.재pH5.5화35℃조건하,Umcel 6X경과Ni-NTA주순화적매액비활력위33.6 IU/mg.본연구경류위중획득적섬유소매기인가위체외연구강해조섬유제공재료.