CAJ | 학술논문

柯浩体(cajal body,CB)是细胞核重要组分,在动植物生长发育以及病毒侵染过程中发挥着重要作用,coilin是CB指示蛋白.为揭示拟南芥(Arabidopsis thaliana)柯浩体蛋白(Atcoilin)的功能和亚细胞定位,本研究采用RT-PCR方法从拟南芥中扩增获得Atcoilin的cDNA,经克隆测序列后,利用生物信息学软件分析预测Atcoilin的亚细胞定位和功能域;将柯浩体蛋白与表达载体pEarley 101(带黄色荧光蛋白)重组,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)接种法将重组蛋白Atcoilin-YFP在本氏烟(Nicotianabenthamiana)叶片表皮细胞中进行瞬时表达,DAPI染色后在激光共聚焦显微镜下观察蛋白的亚细胞定位.生物信息学分析表明,Atcoilin亚细胞定位在细胞核上,该蛋白编码608个氨基酸,可分为3个功能域(N端有序折叠区,中间无序折叠区及C端区),与人类柯浩体蛋白高度同源,两者氨基酸序列总体一致性为50％; Western blot证实,重组表达载体在本氏烟中得到了正确的表达,并在激光共聚焦显微镜下观察,显示该蛋白定位在细胞核内.功能预测及细胞定位结果为该蛋白功能的深入研究提供基础资料.
가호체(cajal body,CB)시세포핵중요조분,재동식물생장발육이급병독침염과정중발휘착중요작용,coilin시CB지시단백.위게시의남개(Arabidopsis thaliana)가호체단백(Atcoilin)적공능화아세포정위,본연구채용RT-PCR방법종의남개중확증획득Atcoilin적cDNA,경극륭측서렬후,이용생물신식학연건분석예측Atcoilin적아세포정위화공능역;장가호체단백여표체재체pEarley 101(대황색형광단백)중조,통과농간균(Agrobacterium tumefaciens)접충법장중조단백Atcoilin-YFP재본씨연(Nicotianabenthamiana)협편표피세포중진행순시표체,DAPI염색후재격광공취초현미경하관찰단백적아세포정위.생물신식학분석표명,Atcoilin아세포정위재세포핵상,해단백편마608개안기산,가분위3개공능역(N단유서절첩구,중간무서절첩구급C단구),여인류가호체단백고도동원,량자안기산서렬총체일치성위50％; Western blot증실,중조표체재체재본씨연중득도료정학적표체,병재격광공취초현미경하관찰,현시해단백정위재세포핵내.공능예측급세포정위결과위해단백공능적심입연구제공기출자료.