中华肝脏外科手术学电子杂志
中華肝髒外科手術學電子雜誌
중화간장외과수술학전자잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATIC SURGERY(ELECTRONIC EDITION)
2013年
3期
186-193
,共8页
陈之巨%林楠%潘楚芝%卢逸%许瑞云
陳之巨%林楠%潘楚芝%盧逸%許瑞雲
진지거%림남%반초지%로일%허서운
癌%肝细胞%肝星形细胞%微血管%疾病模型,动物%小鼠,近交BALB C
癌%肝細胞%肝星形細胞%微血管%疾病模型,動物%小鼠,近交BALB C
암%간세포%간성형세포%미혈관%질병모형,동물%소서,근교BALB C
目的 探讨活化态的肝星状细胞(HSC)对小鼠肝细胞肝癌(肝癌)血管形成、肿瘤生长及转移的作用.方法 将30 只BALB/c-nu 雌性裸鼠按随机数字表法分成3 组,每组各10 只,单纯组将1×106 个H22 肝癌细胞注射于裸鼠肝脏,低浓度组将1×106 个H22 肝癌细胞及1×105 个羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记的HSC-T6 细胞注射于裸鼠肝脏,高浓度组将1×106 个H22 肝癌细胞及4×105 个CFSE 标记的HSC-T6 细胞注射于裸鼠肝脏;各组裸鼠生长50 d 后处死,观察肝原位肿瘤、肝转移瘤、肺转移瘤的数量和体积.应用免疫组织化学方法(免疫组化法)检测肝原发肿瘤组织、肝转移瘤组织及肺转移瘤α- 平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、分化群抗原(CD)34、血管内皮生长因子(VEGF)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平;用蛋白质印迹法检测VEGF 蛋白含量.观察HSC 对肝癌血管形成、增殖作用影响.两组实验数据比较采用t 检验,3 组实验数据比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t 检验.结果 免疫荧光法检测显示HSC-T6 细胞株中HSC 细胞纯度>95%,CFSE 标记的HSC 为绿色荧光细胞,细胞培养8 周,CFSE 染色的荧光强度稳定.单纯组肝癌成瘤率70%,低浓度组成瘤率70%,高浓度组成瘤率为80豫.高浓度组肝内原位肿瘤体积明显大于低浓度组及单纯肝癌细胞组,差异有统计学意义(LSD-t=0.04,0.04;P<0.05).高浓度组裸鼠肝内转移瘤及肺转移瘤数目明显多于低浓度组及单纯组(LSD-t=0.33,0.57;P<0.05).单纯组、低浓度组及高浓度组原发肿瘤组织中α-SMA 数密度分别为(19±4)、(42±4)及(62±6)个/高倍镜视野,高浓度组α-SMA 数密度明显多于低浓度组及单纯肝癌细胞组,差异有统计学意义(LSD-t=2.12,2.12;P<0.05);单纯组、低浓度组及高浓度组原发肿瘤组织中GFAP 数密度分别为(15±4)、(36±5)、(57±5)个/高倍镜视野,高浓度组GFAP 数密度明显多于低浓度组及单纯肝癌细胞组,差异有统计学意义(LSD-t=2.00,2.00;P<0.05).单纯组、低浓度组及高浓度组原发肿瘤组织中CD34 数密度分别为(19.0±2.6)、(31.0±6.2)、(43.0±8.3)个/高倍镜视野,高浓度组CD34 数密度明显多于低浓度组及单纯组(LSD-t=2.75,2.75;P<0.05).肝转移瘤组织标本中,肿瘤直径<1 mm 的肝转移瘤中见微量CD34 表达,数密度为(2.1±0.6)个/高倍镜视野;在肿瘤直径为1~3 mm 的肝转移瘤中,CD34 表达的数密度为(11.2±3.3)个/高倍镜视野,明显多于在直径<1 mm 的肝转移瘤组织(t=8.69,P<0.05).单纯组、低浓度组及高浓度组原位肿瘤标本中VEGF 吸光度值分别为0.21±0.05、0.31±0.06、0.42±0.06,高浓度组VEGF 吸光度值明显高于低密度组及单纯组(LSD-t=0.07,0.07;P<0.05).单纯组、低浓度组及高浓度组肝原位肿瘤VEGF 蛋白相对含量分别为0.19±0.02、0.36±0.05、0.45±0.06,高浓度组VEGF 蛋白相对含量明显高于低密度组及单纯组(LSD-t=0.02,0.02;P<0.05).单纯组、低浓度组及高浓度组原位肿瘤标本PCNA 增殖指数(PCNA-LI)分别为(46±7)%、(68±10)%、(87±9)%,高浓度组明显多于低浓度组和单纯组,差异有统计学意义(LSD-t=3.89,3.89;P<0.05).结论 HSC 可能通过调节肝癌血管形成而影响肝癌生长及转移.
目的 探討活化態的肝星狀細胞(HSC)對小鼠肝細胞肝癌(肝癌)血管形成、腫瘤生長及轉移的作用.方法 將30 隻BALB/c-nu 雌性裸鼠按隨機數字錶法分成3 組,每組各10 隻,單純組將1×106 箇H22 肝癌細胞註射于裸鼠肝髒,低濃度組將1×106 箇H22 肝癌細胞及1×105 箇羥基熒光素二醋痠鹽琥珀酰亞胺酯(CFSE)標記的HSC-T6 細胞註射于裸鼠肝髒,高濃度組將1×106 箇H22 肝癌細胞及4×105 箇CFSE 標記的HSC-T6 細胞註射于裸鼠肝髒;各組裸鼠生長50 d 後處死,觀察肝原位腫瘤、肝轉移瘤、肺轉移瘤的數量和體積.應用免疫組織化學方法(免疫組化法)檢測肝原髮腫瘤組織、肝轉移瘤組織及肺轉移瘤α- 平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、膠質纖維痠性蛋白(GFAP)、分化群抗原(CD)34、血管內皮生長因子(VEGF)及增殖細胞覈抗原(PCNA)的錶達水平;用蛋白質印跡法檢測VEGF 蛋白含量.觀察HSC 對肝癌血管形成、增殖作用影響.兩組實驗數據比較採用t 檢驗,3 組實驗數據比較採用單因素方差分析,兩兩比較採用LSD-t 檢驗.結果 免疫熒光法檢測顯示HSC-T6 細胞株中HSC 細胞純度>95%,CFSE 標記的HSC 為綠色熒光細胞,細胞培養8 週,CFSE 染色的熒光彊度穩定.單純組肝癌成瘤率70%,低濃度組成瘤率70%,高濃度組成瘤率為80豫.高濃度組肝內原位腫瘤體積明顯大于低濃度組及單純肝癌細胞組,差異有統計學意義(LSD-t=0.04,0.04;P<0.05).高濃度組裸鼠肝內轉移瘤及肺轉移瘤數目明顯多于低濃度組及單純組(LSD-t=0.33,0.57;P<0.05).單純組、低濃度組及高濃度組原髮腫瘤組織中α-SMA 數密度分彆為(19±4)、(42±4)及(62±6)箇/高倍鏡視野,高濃度組α-SMA 數密度明顯多于低濃度組及單純肝癌細胞組,差異有統計學意義(LSD-t=2.12,2.12;P<0.05);單純組、低濃度組及高濃度組原髮腫瘤組織中GFAP 數密度分彆為(15±4)、(36±5)、(57±5)箇/高倍鏡視野,高濃度組GFAP 數密度明顯多于低濃度組及單純肝癌細胞組,差異有統計學意義(LSD-t=2.00,2.00;P<0.05).單純組、低濃度組及高濃度組原髮腫瘤組織中CD34 數密度分彆為(19.0±2.6)、(31.0±6.2)、(43.0±8.3)箇/高倍鏡視野,高濃度組CD34 數密度明顯多于低濃度組及單純組(LSD-t=2.75,2.75;P<0.05).肝轉移瘤組織標本中,腫瘤直徑<1 mm 的肝轉移瘤中見微量CD34 錶達,數密度為(2.1±0.6)箇/高倍鏡視野;在腫瘤直徑為1~3 mm 的肝轉移瘤中,CD34 錶達的數密度為(11.2±3.3)箇/高倍鏡視野,明顯多于在直徑<1 mm 的肝轉移瘤組織(t=8.69,P<0.05).單純組、低濃度組及高濃度組原位腫瘤標本中VEGF 吸光度值分彆為0.21±0.05、0.31±0.06、0.42±0.06,高濃度組VEGF 吸光度值明顯高于低密度組及單純組(LSD-t=0.07,0.07;P<0.05).單純組、低濃度組及高濃度組肝原位腫瘤VEGF 蛋白相對含量分彆為0.19±0.02、0.36±0.05、0.45±0.06,高濃度組VEGF 蛋白相對含量明顯高于低密度組及單純組(LSD-t=0.02,0.02;P<0.05).單純組、低濃度組及高濃度組原位腫瘤標本PCNA 增殖指數(PCNA-LI)分彆為(46±7)%、(68±10)%、(87±9)%,高濃度組明顯多于低濃度組和單純組,差異有統計學意義(LSD-t=3.89,3.89;P<0.05).結論 HSC 可能通過調節肝癌血管形成而影響肝癌生長及轉移.
목적 탐토활화태적간성상세포(HSC)대소서간세포간암(간암)혈관형성、종류생장급전이적작용.방법 장30 지BALB/c-nu 자성라서안수궤수자표법분성3 조,매조각10 지,단순조장1×106 개H22 간암세포주사우라서간장,저농도조장1×106 개H22 간암세포급1×105 개간기형광소이작산염호박선아알지(CFSE)표기적HSC-T6 세포주사우라서간장,고농도조장1×106 개H22 간암세포급4×105 개CFSE 표기적HSC-T6 세포주사우라서간장;각조라서생장50 d 후처사,관찰간원위종류、간전이류、폐전이류적수량화체적.응용면역조직화학방법(면역조화법)검측간원발종류조직、간전이류조직급폐전이류α- 평활기기동단백(α-SMA)、효질섬유산성단백(GFAP)、분화군항원(CD)34、혈관내피생장인자(VEGF)급증식세포핵항원(PCNA)적표체수평;용단백질인적법검측VEGF 단백함량.관찰HSC 대간암혈관형성、증식작용영향.량조실험수거비교채용t 검험,3 조실험수거비교채용단인소방차분석,량량비교채용LSD-t 검험.결과 면역형광법검측현시HSC-T6 세포주중HSC 세포순도>95%,CFSE 표기적HSC 위록색형광세포,세포배양8 주,CFSE 염색적형광강도은정.단순조간암성류솔70%,저농도조성류솔70%,고농도조성류솔위80예.고농도조간내원위종류체적명현대우저농도조급단순간암세포조,차이유통계학의의(LSD-t=0.04,0.04;P<0.05).고농도조라서간내전이류급폐전이류수목명현다우저농도조급단순조(LSD-t=0.33,0.57;P<0.05).단순조、저농도조급고농도조원발종류조직중α-SMA 수밀도분별위(19±4)、(42±4)급(62±6)개/고배경시야,고농도조α-SMA 수밀도명현다우저농도조급단순간암세포조,차이유통계학의의(LSD-t=2.12,2.12;P<0.05);단순조、저농도조급고농도조원발종류조직중GFAP 수밀도분별위(15±4)、(36±5)、(57±5)개/고배경시야,고농도조GFAP 수밀도명현다우저농도조급단순간암세포조,차이유통계학의의(LSD-t=2.00,2.00;P<0.05).단순조、저농도조급고농도조원발종류조직중CD34 수밀도분별위(19.0±2.6)、(31.0±6.2)、(43.0±8.3)개/고배경시야,고농도조CD34 수밀도명현다우저농도조급단순조(LSD-t=2.75,2.75;P<0.05).간전이류조직표본중,종류직경<1 mm 적간전이류중견미량CD34 표체,수밀도위(2.1±0.6)개/고배경시야;재종류직경위1~3 mm 적간전이류중,CD34 표체적수밀도위(11.2±3.3)개/고배경시야,명현다우재직경<1 mm 적간전이류조직(t=8.69,P<0.05).단순조、저농도조급고농도조원위종류표본중VEGF 흡광도치분별위0.21±0.05、0.31±0.06、0.42±0.06,고농도조VEGF 흡광도치명현고우저밀도조급단순조(LSD-t=0.07,0.07;P<0.05).단순조、저농도조급고농도조간원위종류VEGF 단백상대함량분별위0.19±0.02、0.36±0.05、0.45±0.06,고농도조VEGF 단백상대함량명현고우저밀도조급단순조(LSD-t=0.02,0.02;P<0.05).단순조、저농도조급고농도조원위종류표본PCNA 증식지수(PCNA-LI)분별위(46±7)%、(68±10)%、(87±9)%,고농도조명현다우저농도조화단순조,차이유통계학의의(LSD-t=3.89,3.89;P<0.05).결론 HSC 가능통과조절간암혈관형성이영향간암생장급전이.
