华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2013年
5期
505-510
,共6页
刘萍%邓元俊%裴广畅%许楚瓯%常晓燕%曾锐%姚颖%徐钢%韩敏
劉萍%鄧元俊%裴廣暢%許楚甌%常曉燕%曾銳%姚穎%徐鋼%韓敏
류평%산원준%배엄창%허초구%상효연%증예%요영%서강%한민
转化生长因子-β1%人脐静脉内皮细胞%内皮细胞向间充质转分化%胞外信号调节激酶
轉化生長因子-β1%人臍靜脈內皮細胞%內皮細胞嚮間充質轉分化%胞外信號調節激酶
전화생장인자-β1%인제정맥내피세포%내피세포향간충질전분화%포외신호조절격매
目的 建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)向间充质转分化的模型并探讨其可能的信号转导途径.方法 以HUVECs为研究对象,分组如下:对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)模型组、TGF-β1+DMSO组以及TGF-β1+抑制剂干预组.TGF-β1模型组应用5 ng/mL TGF-β1刺激HUVECs 72 h;TGF-β1+DMSO组应用5 ng/mL TGF-β1及1 μL/mL DMSO刺激HUVECs 72 h;TGF-β1+抑制剂干预组分别应用p38 MAPK抑制剂SB203580(5 mmol/L)或ERK抑制剂U0126(10 mmol/L)或JNK抑制剂SP600125(5 mmol/L)干预TGF-β1诱导的内皮细胞,倒置显微镜观察内皮细胞形态,应用免疫荧光法检测VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)和α-肌动蛋白(α-SMA)在细胞内的分布情况;并应用Western blot法检测VE-cadherin和α-SMA的蛋白表达情况.结果 TGF-β1(5 ng/mL)刺激HUVECs 72 h后,内皮细胞形态由卵圆形铺路石状向梭形转变,与0 h相比,VE-cadherin蛋白表达显著下调(P<0.05),α-SMA蛋白表达显著上调(P<0.05).抑制ERK1/2信号转导通路,可维持HUVECs内皮细胞表型以及VE-cadherin在内皮细胞的表达,抑制α-SMA蛋白表达,与TGF-β1模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);抑制p38 MAPK和JNK通路,与TGF-β1模型组相比,HUVECs表型、VE-cadherin和α-SMA蛋白表达未见明显差异.结论 TGF-β1可诱导内皮细胞向间充质转分化,应用U0126抑制ERK1/2信号途径可抑制内皮细胞转分化的进展,提示ERK1/2的活化可能是该过程重要的信号转导途径.
目的 建立人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)嚮間充質轉分化的模型併探討其可能的信號轉導途徑.方法 以HUVECs為研究對象,分組如下:對照組、轉化生長因子-β1(TGF-β1)模型組、TGF-β1+DMSO組以及TGF-β1+抑製劑榦預組.TGF-β1模型組應用5 ng/mL TGF-β1刺激HUVECs 72 h;TGF-β1+DMSO組應用5 ng/mL TGF-β1及1 μL/mL DMSO刺激HUVECs 72 h;TGF-β1+抑製劑榦預組分彆應用p38 MAPK抑製劑SB203580(5 mmol/L)或ERK抑製劑U0126(10 mmol/L)或JNK抑製劑SP600125(5 mmol/L)榦預TGF-β1誘導的內皮細胞,倒置顯微鏡觀察內皮細胞形態,應用免疫熒光法檢測VE-鈣粘蛋白(VE-cadherin)和α-肌動蛋白(α-SMA)在細胞內的分佈情況;併應用Western blot法檢測VE-cadherin和α-SMA的蛋白錶達情況.結果 TGF-β1(5 ng/mL)刺激HUVECs 72 h後,內皮細胞形態由卵圓形鋪路石狀嚮梭形轉變,與0 h相比,VE-cadherin蛋白錶達顯著下調(P<0.05),α-SMA蛋白錶達顯著上調(P<0.05).抑製ERK1/2信號轉導通路,可維持HUVECs內皮細胞錶型以及VE-cadherin在內皮細胞的錶達,抑製α-SMA蛋白錶達,與TGF-β1模型組相比,差異具有統計學意義(P<0.05);抑製p38 MAPK和JNK通路,與TGF-β1模型組相比,HUVECs錶型、VE-cadherin和α-SMA蛋白錶達未見明顯差異.結論 TGF-β1可誘導內皮細胞嚮間充質轉分化,應用U0126抑製ERK1/2信號途徑可抑製內皮細胞轉分化的進展,提示ERK1/2的活化可能是該過程重要的信號轉導途徑.
목적 건립인제정맥내피세포(HUVECs)향간충질전분화적모형병탐토기가능적신호전도도경.방법 이HUVECs위연구대상,분조여하:대조조、전화생장인자-β1(TGF-β1)모형조、TGF-β1+DMSO조이급TGF-β1+억제제간예조.TGF-β1모형조응용5 ng/mL TGF-β1자격HUVECs 72 h;TGF-β1+DMSO조응용5 ng/mL TGF-β1급1 μL/mL DMSO자격HUVECs 72 h;TGF-β1+억제제간예조분별응용p38 MAPK억제제SB203580(5 mmol/L)혹ERK억제제U0126(10 mmol/L)혹JNK억제제SP600125(5 mmol/L)간예TGF-β1유도적내피세포,도치현미경관찰내피세포형태,응용면역형광법검측VE-개점단백(VE-cadherin)화α-기동단백(α-SMA)재세포내적분포정황;병응용Western blot법검측VE-cadherin화α-SMA적단백표체정황.결과 TGF-β1(5 ng/mL)자격HUVECs 72 h후,내피세포형태유란원형포로석상향사형전변,여0 h상비,VE-cadherin단백표체현저하조(P<0.05),α-SMA단백표체현저상조(P<0.05).억제ERK1/2신호전도통로,가유지HUVECs내피세포표형이급VE-cadherin재내피세포적표체,억제α-SMA단백표체,여TGF-β1모형조상비,차이구유통계학의의(P<0.05);억제p38 MAPK화JNK통로,여TGF-β1모형조상비,HUVECs표형、VE-cadherin화α-SMA단백표체미견명현차이.결론 TGF-β1가유도내피세포향간충질전분화,응용U0126억제ERK1/2신호도경가억제내피세포전분화적진전,제시ERK1/2적활화가능시해과정중요적신호전도도경.
