国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2013年
21期
2803-2805
,共3页
卵巢癌%抗体%制备%基因,KiSS-1
卵巢癌%抗體%製備%基因,KiSS-1
란소암%항체%제비%기인,KiSS-1
目的 制备兔抗人KiSS-1多克隆抗体.方法 聚合酶链反应(PCR)法扩增出KiSS-1基因,将其克隆入原核表达载体pET28中,转化大肠埃希菌BL21(DE3).采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达,采用镍离子螯合琼脂糖凝胶(Ni2+-NTA)亲和层析法纯化重组蛋白,以之为免疫原免疫家兔,制备多克隆抗体,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)、Western blot及免疫组织化学法检测抗体.结果 成功构建了KiSS-1原核表达载体pET28/ KiSS-1,高效表达并纯化KiSS-1蛋白,间接ELISA检测所制备抗体的效价为1:6 400.Western blot鉴定制备的抗体与KiSS-1蛋白能特异性结合,免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人卵巢癌组织中的天然KiSS-1.结论 成功制备了效价高、特异性较强的兔抗人KiSS-1抗体,为进一步探讨KiSS-1在卵巢癌的发生、发展过程中的作用奠定了基础.
目的 製備兔抗人KiSS-1多剋隆抗體.方法 聚閤酶鏈反應(PCR)法擴增齣KiSS-1基因,將其剋隆入原覈錶達載體pET28中,轉化大腸埃希菌BL21(DE3).採用異丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導重組蛋白的錶達,採用鎳離子螯閤瓊脂糖凝膠(Ni2+-NTA)親和層析法純化重組蛋白,以之為免疫原免疫傢兔,製備多剋隆抗體,併用酶聯免疫吸附測定(ELISA)、Western blot及免疫組織化學法檢測抗體.結果 成功構建瞭KiSS-1原覈錶達載體pET28/ KiSS-1,高效錶達併純化KiSS-1蛋白,間接ELISA檢測所製備抗體的效價為1:6 400.Western blot鑒定製備的抗體與KiSS-1蛋白能特異性結閤,免疫組織化學法檢測結果錶明該抗體識彆人卵巢癌組織中的天然KiSS-1.結論 成功製備瞭效價高、特異性較彊的兔抗人KiSS-1抗體,為進一步探討KiSS-1在卵巢癌的髮生、髮展過程中的作用奠定瞭基礎.
목적 제비토항인KiSS-1다극륭항체.방법 취합매련반응(PCR)법확증출KiSS-1기인,장기극륭입원핵표체재체pET28중,전화대장애희균BL21(DE3).채용이병기-D-류대반유당감(IPTG)유도중조단백적표체,채용얼리자오합경지당응효(Ni2+-NTA)친화층석법순화중조단백,이지위면역원면역가토,제비다극륭항체,병용매련면역흡부측정(ELISA)、Western blot급면역조직화학법검측항체.결과 성공구건료KiSS-1원핵표체재체pET28/ KiSS-1,고효표체병순화KiSS-1단백,간접ELISA검측소제비항체적효개위1:6 400.Western blot감정제비적항체여KiSS-1단백능특이성결합,면역조직화학법검측결과표명해항체식별인란소암조직중적천연KiSS-1.결론 성공제비료효개고、특이성교강적토항인KiSS-1항체,위진일보탐토KiSS-1재란소암적발생、발전과정중적작용전정료기출.
