浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2012年
6期
662-668
,共7页
李泽莉%丁海涛%杨玉义%陈雪娇%赵宇华%周启发
李澤莉%丁海濤%楊玉義%陳雪嬌%趙宇華%週啟髮
리택리%정해도%양옥의%진설교%조우화%주계발
细胞色素P450%CYP102A16蛋白%酶活性%影响因素
細胞色素P450%CYP102A16蛋白%酶活性%影響因素
세포색소P450%CYP102A16단백%매활성%영향인소
通过异源表达及Ni-NTA亲和层析纯化获得重组Bacillus sp.C3细胞色素P450 CYP102A16蛋白；以CYP102A16纯酶为研究对象,系统研究温度、pH、有机溶剂、表面活性剂、金属和非金属离子等对该酶活性及其稳定性的影响；用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)消减法测定CYP102A16的酶活性.结果表明:CYP102A16的最适反应温度为35℃,最适反应pH为6.5～7.5,该酶在45℃以下、pH 5.0～10.0的范围内稳定；CYP102A16能完全耐受20％二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、30％甲醇、10％乙醇和20％丙酮,经10％乙腈、正丙醇和异丙醇处理后残余酶活性在45％以上,经10％正丁醇处理几乎失活;添加低质量浓度氯代十六烷基吡啶(cetylpyridine chloride,CPC) (0.003～0.02 g/L)和聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100) (0.1～0.2 g/L) 可使CYP102A16酶活性分别提高40％和60％左右,而添加低质量浓度十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate,SDS) (0.004～0.008 g/L)对该酶活性无显著影响；1～20 mmol/L K+、20～50 mmol/L Na+、0.05 mmol/LCd2+对CYP102A16酶活性表现出轻微的促进效应,NH4+、Ca2+、Mg2+、Fe3+、C o2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+和乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)均能不同程度地抑制CYP102A16的活性,在离子浓度为1～100mmol/L时抑制效应表现为Ca2+＞ Mg2+＞ NH4+＞ EDTA,抑制作用的大小总体上与离子浓度呈正相关.
通過異源錶達及Ni-NTA親和層析純化穫得重組Bacillus sp.C3細胞色素P450 CYP102A16蛋白；以CYP102A16純酶為研究對象,繫統研究溫度、pH、有機溶劑、錶麵活性劑、金屬和非金屬離子等對該酶活性及其穩定性的影響；用還原型煙酰胺腺嘌呤二覈苷痠燐痠(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)消減法測定CYP102A16的酶活性.結果錶明:CYP102A16的最適反應溫度為35℃,最適反應pH為6.5～7.5,該酶在45℃以下、pH 5.0～10.0的範圍內穩定；CYP102A16能完全耐受20％二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、30％甲醇、10％乙醇和20％丙酮,經10％乙腈、正丙醇和異丙醇處理後殘餘酶活性在45％以上,經10％正丁醇處理幾乎失活;添加低質量濃度氯代十六烷基吡啶(cetylpyridine chloride,CPC) (0.003～0.02 g/L)和聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100) (0.1～0.2 g/L) 可使CYP102A16酶活性分彆提高40％和60％左右,而添加低質量濃度十二烷基硫痠鈉(sodium dodecyl sulphate,SDS) (0.004～0.008 g/L)對該酶活性無顯著影響；1～20 mmol/L K+、20～50 mmol/L Na+、0.05 mmol/LCd2+對CYP102A16酶活性錶現齣輕微的促進效應,NH4+、Ca2+、Mg2+、Fe3+、C o2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+和乙二胺四乙痠(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)均能不同程度地抑製CYP102A16的活性,在離子濃度為1～100mmol/L時抑製效應錶現為Ca2+＞ Mg2+＞ NH4+＞ EDTA,抑製作用的大小總體上與離子濃度呈正相關.
통과이원표체급Ni-NTA친화층석순화획득중조Bacillus sp.C3세포색소P450 CYP102A16단백；이CYP102A16순매위연구대상,계통연구온도、pH、유궤용제、표면활성제、금속화비금속리자등대해매활성급기은정성적영향；용환원형연선알선표령이핵감산린산(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)소감법측정CYP102A16적매활성.결과표명:CYP102A16적최괄반응온도위35℃,최괄반응pH위6.5～7.5,해매재45℃이하、pH 5.0～10.0적범위내은정；CYP102A16능완전내수20％이갑기아풍(dimethylsulfoxide,DMSO)、30％갑순、10％을순화20％병동,경10％을정、정병순화이병순처리후잔여매활성재45％이상,경10％정정순처리궤호실활;첨가저질량농도록대십륙완기필정(cetylpyridine chloride,CPC) (0.003～0.02 g/L)화취을이순신기분기미(TritonX-100) (0.1～0.2 g/L) 가사CYP102A16매활성분별제고40％화60％좌우,이첨가저질량농도십이완기류산납(sodium dodecyl sulphate,SDS) (0.004～0.008 g/L)대해매활성무현저영향；1～20 mmol/L K+、20～50 mmol/L Na+、0.05 mmol/LCd2+대CYP102A16매활성표현출경미적촉진효응,NH4+、Ca2+、Mg2+、Fe3+、C o2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+화을이알사을산(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)균능불동정도지억제CYP102A16적활성,재리자농도위1～100mmol/L시억제효응표현위Ca2+＞ Mg2+＞ NH4+＞ EDTA,억제작용적대소총체상여리자농도정정상관.
