浙江中医药大学学报
浙江中醫藥大學學報
절강중의약대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
2013年
1期
74-78
,共5页
郭伟%赵伟春%徐阳%金艳婷%祝丽欣
郭偉%趙偉春%徐暘%金豔婷%祝麗訢
곽위%조위춘%서양%금염정%축려흔
三叶草斑潜蝇%DNA条形码%ELISA%ITS1序列%COI序列
三葉草斑潛蠅%DNA條形碼%ELISA%ITS1序列%COI序列
삼협초반잠승%DNA조형마%ELISA%ITS1서렬%COI서렬
[目的]探讨以COI和ITS1序列为条形码和间接ELISA方法鉴定三叶草斑潜蝇的可行性.[方法]①提取实验室饲养的三叶草斑潜蝇基因组DNA,扩增了三叶草斑潜蝇细胞色素C氧化酶亚基I(COI)和内转录第一间隔区(ITS1)序列,经测序、拼接后,与Genbank中三叶草斑潜蝇、美洲斑潜蝇、南美斑潜蝇及豌豆彩潜蝇的COI及ITS1序列进行比对,并进行遗传分析.②基于本实验室建立的ELISA检测方法,分别检测了三叶草斑潜蝇单克隆抗体与南美斑潜蝇及豌豆彩潜蝇的幼虫、蛹和成虫的交叉反应情况.[结果](COI和ITS1序列均可以将三叶草斑潜蝇同其它3种近缘种区分开.对于COI序列,三叶草斑潜蝇与南美斑潜蝇相似度为68％,亲缘关系最近；对于ITS1序列,三叶草斑潜蝇与美洲斑潜蝇相似度为88.5％,亲缘关系最近.②间接ELISA检测只有三叶草斑潜蝇呈阳性反应,与南美斑潜蝇及豌豆彩潜蝇幼虫、蛹和成虫均不发生交叉反应.[结论]以COI或ITS1序列为条形码的DNA鉴定法和以单克隆抗体为基础的ELISA检测均可区分三叶草斑潜蝇与其它3种近缘种.其中COI序列作为条形码鉴定可信度优于ITS1序列,ELISA方法操作简单,成本低,更适于田间大量样品的鉴定.
[目的]探討以COI和ITS1序列為條形碼和間接ELISA方法鑒定三葉草斑潛蠅的可行性.[方法]①提取實驗室飼養的三葉草斑潛蠅基因組DNA,擴增瞭三葉草斑潛蠅細胞色素C氧化酶亞基I(COI)和內轉錄第一間隔區(ITS1)序列,經測序、拼接後,與Genbank中三葉草斑潛蠅、美洲斑潛蠅、南美斑潛蠅及豌豆綵潛蠅的COI及ITS1序列進行比對,併進行遺傳分析.②基于本實驗室建立的ELISA檢測方法,分彆檢測瞭三葉草斑潛蠅單剋隆抗體與南美斑潛蠅及豌豆綵潛蠅的幼蟲、蛹和成蟲的交扠反應情況.[結果](COI和ITS1序列均可以將三葉草斑潛蠅同其它3種近緣種區分開.對于COI序列,三葉草斑潛蠅與南美斑潛蠅相似度為68％,親緣關繫最近；對于ITS1序列,三葉草斑潛蠅與美洲斑潛蠅相似度為88.5％,親緣關繫最近.②間接ELISA檢測隻有三葉草斑潛蠅呈暘性反應,與南美斑潛蠅及豌豆綵潛蠅幼蟲、蛹和成蟲均不髮生交扠反應.[結論]以COI或ITS1序列為條形碼的DNA鑒定法和以單剋隆抗體為基礎的ELISA檢測均可區分三葉草斑潛蠅與其它3種近緣種.其中COI序列作為條形碼鑒定可信度優于ITS1序列,ELISA方法操作簡單,成本低,更適于田間大量樣品的鑒定.
[목적]탐토이COI화ITS1서렬위조형마화간접ELISA방법감정삼협초반잠승적가행성.[방법]①제취실험실사양적삼협초반잠승기인조DNA,확증료삼협초반잠승세포색소C양화매아기I(COI)화내전록제일간격구(ITS1)서렬,경측서、병접후,여Genbank중삼협초반잠승、미주반잠승、남미반잠승급완두채잠승적COI급ITS1서렬진행비대,병진행유전분석.②기우본실험실건립적ELISA검측방법,분별검측료삼협초반잠승단극륭항체여남미반잠승급완두채잠승적유충、용화성충적교차반응정황.[결과](COI화ITS1서렬균가이장삼협초반잠승동기타3충근연충구분개.대우COI서렬,삼협초반잠승여남미반잠승상사도위68％,친연관계최근；대우ITS1서렬,삼협초반잠승여미주반잠승상사도위88.5％,친연관계최근.②간접ELISA검측지유삼협초반잠승정양성반응,여남미반잠승급완두채잠승유충、용화성충균불발생교차반응.[결론]이COI혹ITS1서렬위조형마적DNA감정법화이단극륭항체위기출적ELISA검측균가구분삼협초반잠승여기타3충근연충.기중COI서렬작위조형마감정가신도우우ITS1서렬,ELISA방법조작간단,성본저,경괄우전간대량양품적감정.
