浙江中医药大学学报
浙江中醫藥大學學報
절강중의약대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
2013年
1期
69-73
,共5页
袁小凤%路京%宋皓军%刘文洪
袁小鳳%路京%宋皓軍%劉文洪
원소봉%로경%송호군%류문홍
浙贝母%根际土壤%DNA提取%巢式PCR%变性凝胶梯度电泳
浙貝母%根際土壤%DNA提取%巢式PCR%變性凝膠梯度電泳
절패모%근제토양%DNA제취%소식PCR%변성응효제도전영
[目的]由于土壤理化性质的复杂性和真菌细胞壁结构的特殊性,从土壤样品中提取真菌基因组DNA往往比较困难,本实验通过方法优化以寻找适合浙贝母土壤真菌DNA的最佳方法.[方法]分别采用传统玻璃珠法,Ultra CleanTM土壤DNA提取试剂盒法及改进的试剂盒法等3种方法,提取宁波浙贝母种植区的根际土壤微生物总DNA,利用巢式PCR扩增真菌DNA片段.[结果]3种方法均可提取土壤微生物总DNA.其中改进的试剂盒法提取的DNA电泳结果条带最清晰,试剂盒法提取的DNA电泳结果次之,传统玻璃珠法提取的DNA电泳条带不清晰,且有拖尾.对上述三种方法所提取的DNA做巢式PCR分析真菌特异性,传统方法电泳无目的条带,试剂盒法只有第一次PCR电泳有目的条带,只有改进的UltracleanTM土壤DNA提取试剂盒法最终获得了350 bp左右的目的条带,而且利用变性凝胶梯度电泳技术(Denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)成功地检测到不同种源以及根际与非根际土中微生物的差异.因此认为改进的试剂盒法为提取土壤真菌DNA的最优选择.[结论]在土壤真菌DNA提取中,合适的振荡方法是土壤真菌能否破壁的关键性因素.
[目的]由于土壤理化性質的複雜性和真菌細胞壁結構的特殊性,從土壤樣品中提取真菌基因組DNA往往比較睏難,本實驗通過方法優化以尋找適閤浙貝母土壤真菌DNA的最佳方法.[方法]分彆採用傳統玻璃珠法,Ultra CleanTM土壤DNA提取試劑盒法及改進的試劑盒法等3種方法,提取寧波浙貝母種植區的根際土壤微生物總DNA,利用巢式PCR擴增真菌DNA片段.[結果]3種方法均可提取土壤微生物總DNA.其中改進的試劑盒法提取的DNA電泳結果條帶最清晰,試劑盒法提取的DNA電泳結果次之,傳統玻璃珠法提取的DNA電泳條帶不清晰,且有拖尾.對上述三種方法所提取的DNA做巢式PCR分析真菌特異性,傳統方法電泳無目的條帶,試劑盒法隻有第一次PCR電泳有目的條帶,隻有改進的UltracleanTM土壤DNA提取試劑盒法最終穫得瞭350 bp左右的目的條帶,而且利用變性凝膠梯度電泳技術(Denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)成功地檢測到不同種源以及根際與非根際土中微生物的差異.因此認為改進的試劑盒法為提取土壤真菌DNA的最優選擇.[結論]在土壤真菌DNA提取中,閤適的振盪方法是土壤真菌能否破壁的關鍵性因素.
[목적]유우토양이화성질적복잡성화진균세포벽결구적특수성,종토양양품중제취진균기인조DNA왕왕비교곤난,본실험통과방법우화이심조괄합절패모토양진균DNA적최가방법.[방법]분별채용전통파리주법,Ultra CleanTM토양DNA제취시제합법급개진적시제합법등3충방법,제취저파절패모충식구적근제토양미생물총DNA,이용소식PCR확증진균DNA편단.[결과]3충방법균가제취토양미생물총DNA.기중개진적시제합법제취적DNA전영결과조대최청석,시제합법제취적DNA전영결과차지,전통파리주법제취적DNA전영조대불청석,차유타미.대상술삼충방법소제취적DNA주소식PCR분석진균특이성,전통방법전영무목적조대,시제합법지유제일차PCR전영유목적조대,지유개진적UltracleanTM토양DNA제취시제합법최종획득료350 bp좌우적목적조대,이차이용변성응효제도전영기술(Denatured gradient gel electrophoresis,DGGE)성공지검측도불동충원이급근제여비근제토중미생물적차이.인차인위개진적시제합법위제취토양진균DNA적최우선택.[결론]재토양진균DNA제취중,합괄적진탕방법시토양진균능부파벽적관건성인소.
