CAJ | 학술논문

目的:探讨应用N端30kDa纤连蛋白片段(Fn-f)建立模拟人类椎间盘退变规律的椎间盘退变动物模型的可行性,为椎间盘退变的防治提供实验模型及实验依据.方法:选取雄性6月龄新西兰大白兔28只,麻醉后使用30G微量注射针和微量注射器,在透视引导下经皮将25μl 1.5μmol/L Fn-f(Fn-f组)或25μl磷酸缓冲液(PBS,0.01mol/L,pH值7.2;PBS组)随机分别注射入不同节段的腰椎间盘中心区.分别于注射4、8、12、16周后获取椎间盘,对椎间盘进行组织学检测(HE、Masson三色及番红O染色),并以RT-PCR法对椎间盘聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的基因表达水平进行分析.结果:与注射PBS椎间盘相比,注射Fn-f椎间盘造模后4周时椎间盘的髓核、纤维环结构以及胞外基质蛋白聚糖等无明显差别；8周时髓核细胞数量减少、细胞簇状分布,被胞外基质分隔开来,纤维环层状结构排列部分出现紊乱,蛋白聚糖染色变浅；12和16周时髓核细胞数量明显减少,细胞变圆,呈明显的成簇聚集分布,纤维环排列明显不规整,各层间出现裂隙,甚至断裂,蛋白聚糖染色明显变浅,甚至部分未见染色.Fn-f组椎间盘聚集蛋白聚糖mRNA表达水平在8、12和16周3个时间点均明显低于PBS组(P＜0.05)；Ⅱ型胶原mRNA表达水平在12和16周时明显低于PBS对照组(P＜0.05).结论:透视引导下兔椎间盘内注射N端30kDa Fn-f可诱导椎间盘产生渐进性退行性病变,该法建立的动物模型可作为研究椎间盘退变的发病机制及防治的实验模板.
목적:탐토응용N단30kDa섬련단백편단(Fn-f)건립모의인류추간반퇴변규률적추간반퇴변동물모형적가행성,위추간반퇴변적방치제공실험모형급실험의거.방법:선취웅성6월령신서란대백토28지,마취후사용30G미량주사침화미량주사기,재투시인도하경피장25μl 1.5μmol/L Fn-f(Fn-f조)혹25μl린산완충액(PBS,0.01mol/L,pH치7.2;PBS조)수궤분별주사입불동절단적요추간반중심구.분별우주사4、8、12、16주후획취추간반,대추간반진행조직학검측(HE、Masson삼색급번홍O염색),병이RT-PCR법대추간반취집단백취당화Ⅱ형효원적기인표체수평진행분석.결과:여주사PBS추간반상비,주사Fn-f추간반조모후4주시추간반적수핵、섬유배결구이급포외기질단백취당등무명현차별；8주시수핵세포수량감소、세포족상분포,피포외기질분격개래,섬유배층상결구배렬부분출현문란,단백취당염색변천；12화16주시수핵세포수량명현감소,세포변원,정명현적성족취집분포,섬유배배렬명현불규정,각층간출현렬극,심지단렬,단백취당염색명현변천,심지부분미견염색.Fn-f조추간반취집단백취당mRNA표체수평재8、12화16주3개시간점균명현저우PBS조(P＜0.05)；Ⅱ형효원mRNA표체수평재12화16주시명현저우PBS대조조(P＜0.05).결론:투시인도하토추간반내주사N단30kDa Fn-f가유도추간반산생점진성퇴행성병변,해법건립적동물모형가작위연구추간반퇴변적발병궤제급방치적실험모판.