中国现代普通外科进展
中國現代普通外科進展
중국현대보통외과진전
CHINESE JOURNAL OF CURRENT ADVANCES IN GENERAL SURGERY
2013年
2期
85-88
,共4页
丁治国%何蓓%陈晓珩%汪唐顺%高翔%李乃卿
丁治國%何蓓%陳曉珩%汪唐順%高翔%李迺卿
정치국%하배%진효형%왕당순%고상%리내경
慢病毒载体%血管内皮生长因子基因%RNA干扰%MHCC97L细胞
慢病毒載體%血管內皮生長因子基因%RNA榦擾%MHCC97L細胞
만병독재체%혈관내피생장인자기인%RNA간우%MHCC97L세포
目的:设计并筛选人血管内皮生长因子(VEGF)有效RNA干扰片段,构建VEGF慢病毒表达载体.方法:对人VEGF基因编码区分析,筛选序列3条,阴性对照序列1条,通过连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证.在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒,测定其滴度.幔病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用Real-time PCR检测干扰效果.结果:测序证实3个VEGF基因RNAi慢病毒载体质粒构建成功.慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度分别为3.23×109、3.30×109、3.73×109 TU/mL.3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L后,VEGF基因在mRNA水平受到抑制,其中miR-200序列效果最佳,对VEGF基因表达的干扰效率可达72％.结论:成功构建并筛选了人VEGF基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究VEGF基因与抗肿瘤药物药效关系提供实验基础.
目的:設計併篩選人血管內皮生長因子(VEGF)有效RNA榦擾片段,構建VEGF慢病毒錶達載體.方法:對人VEGF基因編碼區分析,篩選序列3條,陰性對照序列1條,通過連接線性化的plenti6.3-MIR載體,構建miRNA慢病毒載體質粒,併轉化至感受態細胞DH5α,進行測序驗證.在脂質體介導下轉染293T細胞,包裝生產慢病毒,測定其滴度.幔病毒載體轉染人肝癌細胞MHCC97L,用Real-time PCR檢測榦擾效果.結果:測序證實3箇VEGF基因RNAi慢病毒載體質粒構建成功.慢病毒載體經293T細胞包裝成功,測定病毒的滴度分彆為3.23×109、3.30×109、3.73×109 TU/mL.3箇慢病毒載體轉染人肝癌細胞MHCC97L後,VEGF基因在mRNA水平受到抑製,其中miR-200序列效果最佳,對VEGF基因錶達的榦擾效率可達72％.結論:成功構建併篩選瞭人VEGF基因RNAi慢病毒載體及有效靶點,為進一步深入研究VEGF基因與抗腫瘤藥物藥效關繫提供實驗基礎.
목적:설계병사선인혈관내피생장인자(VEGF)유효RNA간우편단,구건VEGF만병독표체재체.방법:대인VEGF기인편마구분석,사선서렬3조,음성대조서렬1조,통과련접선성화적plenti6.3-MIR재체,구건miRNA만병독재체질립,병전화지감수태세포DH5α,진행측서험증.재지질체개도하전염293T세포,포장생산만병독,측정기적도.만병독재체전염인간암세포MHCC97L,용Real-time PCR검측간우효과.결과:측서증실3개VEGF기인RNAi만병독재체질립구건성공.만병독재체경293T세포포장성공,측정병독적적도분별위3.23×109、3.30×109、3.73×109 TU/mL.3개만병독재체전염인간암세포MHCC97L후,VEGF기인재mRNA수평수도억제,기중miR-200서렬효과최가,대VEGF기인표체적간우효솔가체72％.결론:성공구건병사선료인VEGF기인RNAi만병독재체급유효파점,위진일보심입연구VEGF기인여항종류약물약효관계제공실험기출.
