科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2014年
4期
179-182
,共4页
陈泉%扈进冬%李哲%郭凯%李纪顺%杨合同
陳泉%扈進鼕%李哲%郭凱%李紀順%楊閤同
진천%호진동%리철%곽개%리기순%양합동
大肠杆菌%乳糖%自诱导%天蚕素AD%BuforinⅡ%融合表达
大腸桿菌%乳糖%自誘導%天蠶素AD%BuforinⅡ%融閤錶達
대장간균%유당%자유도%천잠소AD%BuforinⅡ%융합표체
E. coli lactose%self-induced%Cecropin AD%Buforin Ⅱ%fusion expression
以包含质粒pET-Trx-CAD-BuforinⅡ的大肠杆菌BI21(DE3)为研究对象,开发了一种利用乳糖自诱导方式表达天蚕素AD和蛙BuforinⅡ的表达系统.首先,在LB培养基中研究了乳糖浓度、诱导时机和诱导时间对目的蛋白表达的影响.然后,利用“分解代谢物阻遏”原理构建乳糖自诱导表达系统,以“葡萄糖+主碳源”两种碳源的依次代谢将蛋白表达过程分为两个阶段:第一阶段为菌体生长阶段,菌体利用葡萄糖生长,乳糖无法进入细胞诱导蛋白表达;第二阶段为蛋白表达阶段,葡萄糖耗尽,菌体开始利用主碳源生长;同时乳糖进入细胞诱导蛋白表达.最后,利用优选的“葡萄糖+木糖”组合自诱导表达天蚕素AD和BuforinⅡ的融合蛋白,得到的目的蛋白占全菌总蛋白含量的45.2％.
以包含質粒pET-Trx-CAD-BuforinⅡ的大腸桿菌BI21(DE3)為研究對象,開髮瞭一種利用乳糖自誘導方式錶達天蠶素AD和蛙BuforinⅡ的錶達繫統.首先,在LB培養基中研究瞭乳糖濃度、誘導時機和誘導時間對目的蛋白錶達的影響.然後,利用“分解代謝物阻遏”原理構建乳糖自誘導錶達繫統,以“葡萄糖+主碳源”兩種碳源的依次代謝將蛋白錶達過程分為兩箇階段:第一階段為菌體生長階段,菌體利用葡萄糖生長,乳糖無法進入細胞誘導蛋白錶達;第二階段為蛋白錶達階段,葡萄糖耗儘,菌體開始利用主碳源生長;同時乳糖進入細胞誘導蛋白錶達.最後,利用優選的“葡萄糖+木糖”組閤自誘導錶達天蠶素AD和BuforinⅡ的融閤蛋白,得到的目的蛋白佔全菌總蛋白含量的45.2％.
이포함질립pET-Trx-CAD-BuforinⅡ적대장간균BI21(DE3)위연구대상,개발료일충이용유당자유도방식표체천잠소AD화와BuforinⅡ적표체계통.수선,재LB배양기중연구료유당농도、유도시궤화유도시간대목적단백표체적영향.연후,이용“분해대사물조알”원리구건유당자유도표체계통,이“포도당+주탄원”량충탄원적의차대사장단백표체과정분위량개계단:제일계단위균체생장계단,균체이용포도당생장,유당무법진입세포유도단백표체;제이계단위단백표체계단,포도당모진,균체개시이용주탄원생장;동시유당진입세포유도단백표체.최후,이용우선적“포도당+목당”조합자유도표체천잠소AD화BuforinⅡ적융합단백,득도적목적단백점전균총단백함량적45.2％.
