西安交通大学学报（医学版）
西安交通大學學報（醫學版）
서안교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2014年
4期
551-556
,共6页
徐珊%杜冲%马艳民%谢宏俊%高杨%石琦%王新阳%贺大林%郭鹏
徐珊%杜遲%馬豔民%謝宏俊%高楊%石琦%王新暘%賀大林%郭鵬
서산%두충%마염민%사굉준%고양%석기%왕신양%하대림%곽붕
HaCaT%电转染%转染条件
HaCaT%電轉染%轉染條件
HaCaT%전전염%전염조건
HaCaT%electrotransfection%transfection condition
目的 比较不同电转染条件下,人永生化表皮细胞HaCaT的转染效率,探讨影响HaCaT电转染率和存活率的主要因素,筛选出HaCaT细胞最佳的电转染条件.方法 应用电穿孔仪,设定不同的电压(180、360、540、720 V)、脉冲时间(40、60、80、100、120μs)、脉冲周期(1、2、3、4、5次)和温度(室温和4℃)等条件,将质粒(pGPU6/GFP/nev)电转染至HaCaT细胞.电转染24 h后,荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数,并随机取3个视野算平均值,计算电转染率;MTT法检测电转染后细胞的存活率.结果 当HaCaT细胞浓度为1.5×106/mL,pGPU6/GFP/nev质粒浓度为2.0 μg/mL,HaCaT细胞的最佳电转染条件为540 V/60 μs/Pulse1/RT,此时细胞生长状态最佳,电转染率可达到33.23％,细胞存活率为61.22％.结论 本实验优化了HaCaT细胞电转染的最佳条件,提高了HaCaT细胞电转染效率,为后续基因功能的研究奠定了基础.
目的 比較不同電轉染條件下,人永生化錶皮細胞HaCaT的轉染效率,探討影響HaCaT電轉染率和存活率的主要因素,篩選齣HaCaT細胞最佳的電轉染條件.方法 應用電穿孔儀,設定不同的電壓(180、360、540、720 V)、脈遲時間(40、60、80、100、120μs)、脈遲週期(1、2、3、4、5次)和溫度(室溫和4℃)等條件,將質粒(pGPU6/GFP/nev)電轉染至HaCaT細胞.電轉染24 h後,熒光鏡下和光鏡下分彆計算綠色熒光暘性細胞數和總細胞數,併隨機取3箇視野算平均值,計算電轉染率;MTT法檢測電轉染後細胞的存活率.結果 噹HaCaT細胞濃度為1.5×106/mL,pGPU6/GFP/nev質粒濃度為2.0 μg/mL,HaCaT細胞的最佳電轉染條件為540 V/60 μs/Pulse1/RT,此時細胞生長狀態最佳,電轉染率可達到33.23％,細胞存活率為61.22％.結論 本實驗優化瞭HaCaT細胞電轉染的最佳條件,提高瞭HaCaT細胞電轉染效率,為後續基因功能的研究奠定瞭基礎.
목적 비교불동전전염조건하,인영생화표피세포HaCaT적전염효솔,탐토영향HaCaT전전염솔화존활솔적주요인소,사선출HaCaT세포최가적전전염조건.방법 응용전천공의,설정불동적전압(180、360、540、720 V)、맥충시간(40、60、80、100、120μs)、맥충주기(1、2、3、4、5차)화온도(실온화4℃)등조건,장질립(pGPU6/GFP/nev)전전염지HaCaT세포.전전염24 h후,형광경하화광경하분별계산록색형광양성세포수화총세포수,병수궤취3개시야산평균치,계산전전염솔;MTT법검측전전염후세포적존활솔.결과 당HaCaT세포농도위1.5×106/mL,pGPU6/GFP/nev질립농도위2.0 μg/mL,HaCaT세포적최가전전염조건위540 V/60 μs/Pulse1/RT,차시세포생장상태최가,전전염솔가체도33.23％,세포존활솔위61.22％.결론 본실험우화료HaCaT세포전전염적최가조건,제고료HaCaT세포전전염효솔,위후속기인공능적연구전정료기출.
