CAJ | 학술논문

为构建布鲁氏菌O抗原聚合酶缺失突变株,本研究以布鲁氏菌M28株为亲本株,利用同源重组方法,以编码O抗原聚合酶靶基因M28_ B0107基因ORF外侧序列作为同源臂构建重组质粒pSP-B0107-K,将其电转化至M28感受态细胞中,以卡那霉素抗性基因(Kanr)作为标记,筛选缺失突变株(M28-△B0107).M28-△B0107经过20余代传代培养,Kanr表达稳定.将M28-△B0107与M28以106 cfu剂量腹腔接种小鼠,进行体内致病性试验.结果显示,M28-△B0107感染组小鼠脾脏荷菌量显著低于亲本M28株感染组,感染6周时,前者低于后者近10倍(p＜0.05)；而且M28-△B0107感染组脾脏重量也显著低于M28强毒株组(p＜0.05)；小鼠腹腔巨噬细胞系(RAW264.7)感染能力试验结果表明,突变株与亲本株无明显差异(p＞0.05).
위구건포로씨균O항원취합매결실돌변주,본연구이포로씨균M28주위친본주,이용동원중조방법,이편마O항원취합매파기인M28_ B0107기인ORF외측서렬작위동원비구건중조질립pSP-B0107-K,장기전전화지M28감수태세포중,이잡나매소항성기인(Kanr)작위표기,사선결실돌변주(M28-△B0107).M28-△B0107경과20여대전대배양,Kanr표체은정.장M28-△B0107여M28이106 cfu제량복강접충소서,진행체내치병성시험.결과현시,M28-△B0107감염조소서비장하균량현저저우친본M28주감염조,감염6주시,전자저우후자근10배(p＜0.05)；이차M28-△B0107감염조비장중량야현저저우M28강독주조(p＜0.05)；소서복강거서세포계(RAW264.7)감염능력시험결과표명,돌변주여친본주무명현차이(p＞0.05).