中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
3期
189-192,201
,共5页
李业南%陈振师%步志高%华荣虹
李業南%陳振師%步誌高%華榮虹
리업남%진진사%보지고%화영홍
流行性乙型脑炎病毒%prM蛋白%蛋白剪切%细胞系
流行性乙型腦炎病毒%prM蛋白%蛋白剪切%細胞繫
류행성을형뇌염병독%prM단백%단백전절%세포계
为建立稳定共表达乙型脑炎病-毒(JEV)完整M前体蛋白(prM)和E蛋白的BHK-21细胞系,本研究在prM蛋白furin蛋白酶剪切位点编码基因中引入突变,将突变后的prM基因克隆于质粒中构建重组表达质粒pCAG-JEV-prM(R89A)E.将重组质粒转染BHK-21细胞,转染48 h后细胞用含G418的选择性培养基选择培养,进一步经细胞克隆纯化制备表达剪切位点突变的JEV prM-E蛋白的稳定细胞系.经IFA和western blot鉴定表明,该细胞系能表达JEV prM与E蛋白,所表达的prM蛋白未发生剪切；细胞经多次传代后仍能够稳定地共表达prM与E蛋白.该细胞系的建立为研究prM蛋白剪切对JEV粒子形成的影响以及亚单位疫苗的制备奠定了基础.
為建立穩定共錶達乙型腦炎病-毒(JEV)完整M前體蛋白(prM)和E蛋白的BHK-21細胞繫,本研究在prM蛋白furin蛋白酶剪切位點編碼基因中引入突變,將突變後的prM基因剋隆于質粒中構建重組錶達質粒pCAG-JEV-prM(R89A)E.將重組質粒轉染BHK-21細胞,轉染48 h後細胞用含G418的選擇性培養基選擇培養,進一步經細胞剋隆純化製備錶達剪切位點突變的JEV prM-E蛋白的穩定細胞繫.經IFA和western blot鑒定錶明,該細胞繫能錶達JEV prM與E蛋白,所錶達的prM蛋白未髮生剪切；細胞經多次傳代後仍能夠穩定地共錶達prM與E蛋白.該細胞繫的建立為研究prM蛋白剪切對JEV粒子形成的影響以及亞單位疫苗的製備奠定瞭基礎.
위건립은정공표체을형뇌염병-독(JEV)완정M전체단백(prM)화E단백적BHK-21세포계,본연구재prM단백furin단백매전절위점편마기인중인입돌변,장돌변후적prM기인극륭우질립중구건중조표체질립pCAG-JEV-prM(R89A)E.장중조질립전염BHK-21세포,전염48 h후세포용함G418적선택성배양기선택배양,진일보경세포극륭순화제비표체전절위점돌변적JEV prM-E단백적은정세포계.경IFA화western blot감정표명,해세포계능표체JEV prM여E단백,소표체적prM단백미발생전절；세포경다차전대후잉능구은정지공표체prM여E단백.해세포계적건립위연구prM단백전절대JEV입자형성적영향이급아단위역묘적제비전정료기출.
