中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
3期
185-188
,共4页
梁特%杨德成%刘蒙蒙%周国辉%孙超%魏萍%于力
樑特%楊德成%劉矇矇%週國輝%孫超%魏萍%于力
량특%양덕성%류몽몽%주국휘%손초%위평%우력
O型口蹄疫病毒%衣壳蛋白%杆状病毒表达
O型口蹄疫病毒%衣殼蛋白%桿狀病毒錶達
O형구제역병독%의각단백%간상병독표체
为构建表达O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白的重组杆状病毒,本研究将FMDV O/YS/CHA/05株的P12A和3C基因克隆于pFastBacl载体中,构建重组转移质粒pFast-P12A3C,将其转化DH10Bac感受态细胞,获得重组杆粒rBacmid-P12A3C.将该重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,制备重组杆状病毒rBV-P12A3C.间接免疫荧光试验(IFA)检测表明,获得的重组杆状病毒在Sf9细胞中能够表达O型FMDV衣壳蛋白.Westemblot分析显示,FMDV的衣壳蛋白和3C蛋白酶均获得表达,并且3C蛋白酶对结构蛋白进行了正确切割.重组蛋白表达的动力学分析显示,表达的FMDV衣壳蛋白具有良好的反应原性,并且在重组杆状病毒感染Sf9细胞后第4d蛋白表达量达到最大.该重组杆状病毒的构建,为研究FMDV空衣壳的体外组装以及O型FMDV空衣壳疫苗的开发建立了实验基础.
為構建錶達O型口蹄疫病毒(FMDV)衣殼蛋白的重組桿狀病毒,本研究將FMDV O/YS/CHA/05株的P12A和3C基因剋隆于pFastBacl載體中,構建重組轉移質粒pFast-P12A3C,將其轉化DH10Bac感受態細胞,穫得重組桿粒rBacmid-P12A3C.將該重組桿粒轉染Sf9昆蟲細胞,製備重組桿狀病毒rBV-P12A3C.間接免疫熒光試驗(IFA)檢測錶明,穫得的重組桿狀病毒在Sf9細胞中能夠錶達O型FMDV衣殼蛋白.Westemblot分析顯示,FMDV的衣殼蛋白和3C蛋白酶均穫得錶達,併且3C蛋白酶對結構蛋白進行瞭正確切割.重組蛋白錶達的動力學分析顯示,錶達的FMDV衣殼蛋白具有良好的反應原性,併且在重組桿狀病毒感染Sf9細胞後第4d蛋白錶達量達到最大.該重組桿狀病毒的構建,為研究FMDV空衣殼的體外組裝以及O型FMDV空衣殼疫苗的開髮建立瞭實驗基礎.
위구건표체O형구제역병독(FMDV)의각단백적중조간상병독,본연구장FMDV O/YS/CHA/05주적P12A화3C기인극륭우pFastBacl재체중,구건중조전이질립pFast-P12A3C,장기전화DH10Bac감수태세포,획득중조간립rBacmid-P12A3C.장해중조간립전염Sf9곤충세포,제비중조간상병독rBV-P12A3C.간접면역형광시험(IFA)검측표명,획득적중조간상병독재Sf9세포중능구표체O형FMDV의각단백.Westemblot분석현시,FMDV적의각단백화3C단백매균획득표체,병차3C단백매대결구단백진행료정학절할.중조단백표체적동역학분석현시,표체적FMDV의각단백구유량호적반응원성,병차재중조간상병독감염Sf9세포후제4d단백표체량체도최대.해중조간상병독적구건,위연구FMDV공의각적체외조장이급O형FMDV공의각역묘적개발건립료실험기출.
