草地学报
草地學報
초지학보
ACTA AGRESTIA SINICA
2013年
3期
581-589
,共9页
高燕丽%龙瑞才%康俊梅%张铁军%杨青川%董宽虎
高燕麗%龍瑞纔%康俊梅%張鐵軍%楊青川%董寬虎
고연려%룡서재%강준매%장철군%양청천%동관호
紫花苜蓿%解旋酶%亚细胞定位%烟草转化
紫花苜蓿%解鏇酶%亞細胞定位%煙草轉化
자화목숙%해선매%아세포정위%연초전화
Medicago sativa L.%RNA helicase%Subcellular localization%Tobacco transformation
基于紫花苜蓿(Medicago sativaL.)盐胁迫抑制消减杂交文库中的一条EST序列,使用RACE技术克隆得到一条1678 bp的cDNA序列.核酸序列分析表明该cDNA序列包含一个1281 bp的最大开放阅读框,编码426个氨基酸,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)RNA解旋酶RH15和RH56的氨基酸序列相似性在90％以上,将该基因命名为MsRH(GenBank序列号:JX508648).对此基因编码蛋白进行结构域预测表明其含有明显的DEXDc和HELICc结构域,预测其为DExD/H box RNA解旋酶.洋葱(Allium cepa)表皮细胞亚细胞定位分析表明MsRH定位于细胞核.为进一步研究此基因的功能,构建了MsRH基因的超表达载体pBI-MsRH,使用农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tobacum),筛选得到5株具有卡那霉素抗性再生烟草植株.PCR和RT-PCR检测结果表明MsRH基因成功插入烟草基因组中并表达.使用250mMNaCl处理7d后,转基因烟草中脯氨酸含量低于野生型烟草,而丙二醛和相对电导率则高于野生型烟草.初步试验结果表明转MsRH基因烟草对盐敏感性升高.
基于紫花苜蓿(Medicago sativaL.)鹽脅迫抑製消減雜交文庫中的一條EST序列,使用RACE技術剋隆得到一條1678 bp的cDNA序列.覈痠序列分析錶明該cDNA序列包含一箇1281 bp的最大開放閱讀框,編碼426箇氨基痠,與擬南芥(Arabidopsis thaliana)RNA解鏇酶RH15和RH56的氨基痠序列相似性在90％以上,將該基因命名為MsRH(GenBank序列號:JX508648).對此基因編碼蛋白進行結構域預測錶明其含有明顯的DEXDc和HELICc結構域,預測其為DExD/H box RNA解鏇酶.洋蔥(Allium cepa)錶皮細胞亞細胞定位分析錶明MsRH定位于細胞覈.為進一步研究此基因的功能,構建瞭MsRH基因的超錶達載體pBI-MsRH,使用農桿菌介導法轉化煙草(Nicotiana tobacum),篩選得到5株具有卡那黴素抗性再生煙草植株.PCR和RT-PCR檢測結果錶明MsRH基因成功插入煙草基因組中併錶達.使用250mMNaCl處理7d後,轉基因煙草中脯氨痠含量低于野生型煙草,而丙二醛和相對電導率則高于野生型煙草.初步試驗結果錶明轉MsRH基因煙草對鹽敏感性升高.
기우자화목숙(Medicago sativaL.)염협박억제소감잡교문고중적일조EST서렬,사용RACE기술극륭득도일조1678 bp적cDNA서렬.핵산서렬분석표명해cDNA서렬포함일개1281 bp적최대개방열독광,편마426개안기산,여의남개(Arabidopsis thaliana)RNA해선매RH15화RH56적안기산서렬상사성재90％이상,장해기인명명위MsRH(GenBank서렬호:JX508648).대차기인편마단백진행결구역예측표명기함유명현적DEXDc화HELICc결구역,예측기위DExD/H box RNA해선매.양총(Allium cepa)표피세포아세포정위분석표명MsRH정위우세포핵.위진일보연구차기인적공능,구건료MsRH기인적초표체재체pBI-MsRH,사용농간균개도법전화연초(Nicotiana tobacum),사선득도5주구유잡나매소항성재생연초식주.PCR화RT-PCR검측결과표명MsRH기인성공삽입연초기인조중병표체.사용250mMNaCl처리7d후,전기인연초중포안산함량저우야생형연초,이병이철화상대전도솔칙고우야생형연초.초보시험결과표명전MsRH기인연초대염민감성승고.
