中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
4期
312-316
,共5页
布日额%任晓峰%吴金花%王学理%刘燕%锡林高娃%孙立杰%刘洋
佈日額%任曉峰%吳金花%王學理%劉燕%錫林高娃%孫立傑%劉洋
포일액%임효봉%오금화%왕학리%류연%석림고왜%손립걸%류양
无乳链球菌%pgk亚单位%免疫效果
無乳鏈毬菌%pgk亞單位%免疫效果
무유련구균%pgk아단위%면역효과
为评价牛乳腺炎无乳链球菌重组表面蛋白(pgk)免疫原性,并通过建立检测抗体的间接ELISA方法对免疫抗体效价进行评价,本研究根据GenBank登录的无乳链球菌pgk基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板PCR扩增出pgk蛋白抗原优势区的编码基因序列.将其插入pET-30a(+)中,并在大肠杆菌中表达.Western blot鉴定表明,表达的重组蛋白与阳性血清具有良好的反应原性.采用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.115 μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶4 000.初步应用于检测无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌小鼠阳性血清的检测.结果表明牛乳腺炎无乳链球菌pgk亚单位抗原具有良好的抗原性,抗体检测灵敏度达到1∶4 000,同时表现良好的特异性.
為評價牛乳腺炎無乳鏈毬菌重組錶麵蛋白(pgk)免疫原性,併通過建立檢測抗體的間接ELISA方法對免疫抗體效價進行評價,本研究根據GenBank登錄的無乳鏈毬菌pgk基因序列,設計一對引物,以臨床分離菌株基因組DNA為模闆PCR擴增齣pgk蛋白抗原優勢區的編碼基因序列.將其插入pET-30a(+)中,併在大腸桿菌中錶達.Western blot鑒定錶明,錶達的重組蛋白與暘性血清具有良好的反應原性.採用純化的錶達產物作為包被抗原建立瞭檢測無乳鏈毬菌抗體的間接ELISA方法,確定抗原最佳包被濃度為3.115 μg/mL,血清最佳稀釋度為1∶160,酶標二抗最適稀釋度為1∶4 000.初步應用于檢測無乳鏈毬菌、化膿性鏈毬菌、大腸桿菌、金黃色葡萄毬菌小鼠暘性血清的檢測.結果錶明牛乳腺炎無乳鏈毬菌pgk亞單位抗原具有良好的抗原性,抗體檢測靈敏度達到1∶4 000,同時錶現良好的特異性.
위평개우유선염무유련구균중조표면단백(pgk)면역원성,병통과건립검측항체적간접ELISA방법대면역항체효개진행평개,본연구근거GenBank등록적무유련구균pgk기인서렬,설계일대인물,이림상분리균주기인조DNA위모판PCR확증출pgk단백항원우세구적편마기인서렬.장기삽입pET-30a(+)중,병재대장간균중표체.Western blot감정표명,표체적중조단백여양성혈청구유량호적반응원성.채용순화적표체산물작위포피항원건립료검측무유련구균항체적간접ELISA방법,학정항원최가포피농도위3.115 μg/mL,혈청최가희석도위1∶160,매표이항최괄희석도위1∶4 000.초보응용우검측무유련구균、화농성련구균、대장간균、금황색포도구균소서양성혈청적검측.결과표명우유선염무유련구균pgk아단위항원구유량호적항원성,항체검측령민도체도1∶4 000,동시표현량호적특이성.
