中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2013年
6期
551-555
,共5页
金东%于波%叶长芸%刘凯%侯雪新%孙渭歌%徐建国%李振军
金東%于波%葉長蕓%劉凱%侯雪新%孫渭歌%徐建國%李振軍
금동%우파%협장예%류개%후설신%손위가%서건국%리진군
屎肠球菌%TaqMan荧光定量PCR%标准曲线
屎腸毬菌%TaqMan熒光定量PCR%標準麯線
시장구균%TaqMan형광정량PCR%표준곡선
目的 建立屎肠球菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法.方法 根据屎肠球菌的ddl基因设计TaqMan荧光定量PCR特异的引物及探针,在多种常见致病菌及条件致病菌中检测其特异性;将目的 基因克隆到pMD18-T载体中建立标准曲线,检测方法的灵敏度和稳定性;使用腹水模拟标本验证方法的应用性.结果 在特异性评价中,除了阳性对照外其余菌株均未见特异性扩增曲线.建立屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线,确定本方法对质粒标准品的检测下限为20copy/管.通过对1.0×107、1.0×105和1.0×1033个浓度质粒标准品的重复检测,确定屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法的组内变异系数为1.90%~3.91%;组间变异系数为1.52%~1.69%.应用屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR方法对含菌量为1.6×100~1.6×108cfu/mL浓度梯度的腹水模拟标本进行检测,其检测灵敏度为1.6×102cfu/mL.结论 本研究建立了屎肠球菌TaqMan荧光定量PCR检测方法.
目的 建立屎腸毬菌的TaqMan熒光定量PCR檢測方法.方法 根據屎腸毬菌的ddl基因設計TaqMan熒光定量PCR特異的引物及探針,在多種常見緻病菌及條件緻病菌中檢測其特異性;將目的 基因剋隆到pMD18-T載體中建立標準麯線,檢測方法的靈敏度和穩定性;使用腹水模擬標本驗證方法的應用性.結果 在特異性評價中,除瞭暘性對照外其餘菌株均未見特異性擴增麯線.建立屎腸毬菌TaqMan熒光定量PCR方法的標準麯線,確定本方法對質粒標準品的檢測下限為20copy/管.通過對1.0×107、1.0×105和1.0×1033箇濃度質粒標準品的重複檢測,確定屎腸毬菌TaqMan熒光定量PCR方法的組內變異繫數為1.90%~3.91%;組間變異繫數為1.52%~1.69%.應用屎腸毬菌TaqMan熒光定量PCR方法對含菌量為1.6×100~1.6×108cfu/mL濃度梯度的腹水模擬標本進行檢測,其檢測靈敏度為1.6×102cfu/mL.結論 本研究建立瞭屎腸毬菌TaqMan熒光定量PCR檢測方法.
목적 건립시장구균적TaqMan형광정량PCR검측방법.방법 근거시장구균적ddl기인설계TaqMan형광정량PCR특이적인물급탐침,재다충상견치병균급조건치병균중검측기특이성;장목적 기인극륭도pMD18-T재체중건립표준곡선,검측방법적령민도화은정성;사용복수모의표본험증방법적응용성.결과 재특이성평개중,제료양성대조외기여균주균미견특이성확증곡선.건립시장구균TaqMan형광정량PCR방법적표준곡선,학정본방법대질립표준품적검측하한위20copy/관.통과대1.0×107、1.0×105화1.0×1033개농도질립표준품적중복검측,학정시장구균TaqMan형광정량PCR방법적조내변이계수위1.90%~3.91%;조간변이계수위1.52%~1.69%.응용시장구균TaqMan형광정량PCR방법대함균량위1.6×100~1.6×108cfu/mL농도제도적복수모의표본진행검측,기검측령민도위1.6×102cfu/mL.결론 본연구건립료시장구균TaqMan형광정량PCR검측방법.
