CAJ | 학술논문

目的建立一种能够快速准确地检测致病性嗜水气单胞菌的四重PCR方法.方法根据致病性嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶(ahpA)基因、气溶素(aerA)基因和溶血素(hlyA)基因的保守序列以及嗜水气单胞菌的16S rRNA基因种属特异性序列分别设计4对特异性引物,通过优化各引物浓度、退火温度和Mg2+浓度,确定了四重PCR的最佳反应条件;然后进行特异性和敏感性试验,并比较其与常规微生物学方法对不同菌株和临床样本的检出率.结果该方法特异性好,能特异性检测并鉴别出嗜水气单胞菌致病性菌株;检测灵敏度高,最低可检测到约100 fg的嗜水气单胞菌基因组DNA;对9株嗜水气单胞菌的检测结果与常规微生物学方法一致,对56份送检的水产动物样品的检出率为21.4%,高于常规微生物学方法的16.1%,两者检测结果符合率为94.6%.结论成功建立了能同时检测嗜水气单胞菌16S rRNA、aerA、ahpA和hlyA基因的四重PCR方法,能快速、准确地对嗜水气单胞菌进行检测并区分致病性与非致病性菌株.
목적 건립일충능구쾌속준학지검측치병성기수기단포균적사중PCR방법.방법 근거치병성기수기단포균적사안산단백매(ahpA)기인、기용소(aerA)기인화용혈소(hlyA)기인적보수서렬이급기수기단포균적16S rRNA기인충속특이성서렬분별설계4대특이성인물,통과우화각인물농도、퇴화온도화Mg2+농도,학정료사중PCR적최가반응조건;연후진행특이성화민감성시험,병비교기여상규미생물학방법대불동균주화림상양본적검출솔.결과 해방법특이성호,능특이성검측병감별출기수기단포균치병성균주;검측령민도고,최저가검측도약100 fg적기수기단포균기인조DNA;대9주기수기단포균적검측결과여상규미생물학방법일치,대56빈송검적수산동물양품적검출솔위21.4%,고우상규미생물학방법적16.1%,량자검측결과부합솔위94.6%.결론 성공건립료능동시검측기수기단포균16S rRNA、aerA、ahpA화hlyA기인적사중PCR방법,능쾌속、준학지대기수기단포균진행검측병구분치병성여비치병성균주.