大连海洋大学学报
大連海洋大學學報
대련해양대학학보
JOURNAL OF DALIAN FISHERIES UNIVERSITY
2013年
5期
424-430
,共7页
魏畅%李华%叶仕根%李强
魏暢%李華%葉仕根%李彊
위창%리화%협사근%리강
鲴爱德华菌%hcp基因%基因克隆%原核表达
鲴愛德華菌%hcp基因%基因剋隆%原覈錶達
고애덕화균%hcp기인%기인극륭%원핵표체
Edwardsiella ictaluri%hcp gene%gene cloning%prokaryotic expression
通过克隆获得鲴爱德华菌Edwardsiella ictaluri LH51溶血素共调节蛋白(Hcp)编码基因hcp,该基因全长为489 bp,编码163个氨基酸,hcp编码蛋白的理论相对分子质量为17 800,等电点为5.21.氨基酸序列分析结果表明,鲴爱德华菌hcp基因与迟钝爱德华菌Edwardsiella tarda毒力蛋白EvpC(Hcp同源物)、发光杆菌Photorhabdus luminescens hcp基因等具有高度同源性.将鲴爱德华菌Hcp氨基酸序列连接至pGS-21a表达载体中,成功构建了pGS-21 a-hcp原核表达质粒;再将表达质粒转化至BL21 (DE3)菌株后,经IPTG诱导、镍柱层析纯化获得大量携带GST和组氨酸双标签的融合蛋白.经SDS-PAGE和Westem blot分析,确认获得了相对分子质量约为45 000的融合蛋白,并成功制备了具有较高效价的多克隆抗体.
通過剋隆穫得鲴愛德華菌Edwardsiella ictaluri LH51溶血素共調節蛋白(Hcp)編碼基因hcp,該基因全長為489 bp,編碼163箇氨基痠,hcp編碼蛋白的理論相對分子質量為17 800,等電點為5.21.氨基痠序列分析結果錶明,鲴愛德華菌hcp基因與遲鈍愛德華菌Edwardsiella tarda毒力蛋白EvpC(Hcp同源物)、髮光桿菌Photorhabdus luminescens hcp基因等具有高度同源性.將鲴愛德華菌Hcp氨基痠序列連接至pGS-21a錶達載體中,成功構建瞭pGS-21 a-hcp原覈錶達質粒;再將錶達質粒轉化至BL21 (DE3)菌株後,經IPTG誘導、鎳柱層析純化穫得大量攜帶GST和組氨痠雙標籤的融閤蛋白.經SDS-PAGE和Westem blot分析,確認穫得瞭相對分子質量約為45 000的融閤蛋白,併成功製備瞭具有較高效價的多剋隆抗體.
통과극륭획득고애덕화균Edwardsiella ictaluri LH51용혈소공조절단백(Hcp)편마기인hcp,해기인전장위489 bp,편마163개안기산,hcp편마단백적이론상대분자질량위17 800,등전점위5.21.안기산서렬분석결과표명,고애덕화균hcp기인여지둔애덕화균Edwardsiella tarda독력단백EvpC(Hcp동원물)、발광간균Photorhabdus luminescens hcp기인등구유고도동원성.장고애덕화균Hcp안기산서렬련접지pGS-21a표체재체중,성공구건료pGS-21 a-hcp원핵표체질립;재장표체질립전화지BL21 (DE3)균주후,경IPTG유도、얼주층석순화획득대량휴대GST화조안산쌍표첨적융합단백.경SDS-PAGE화Westem blot분석,학인획득료상대분자질량약위45 000적융합단백,병성공제비료구유교고효개적다극륭항체.
