中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
5期
355-358
,共4页
许莉莉%于申业%田秋丰%衣菲%刘思国
許莉莉%于申業%田鞦豐%衣菲%劉思國
허리리%우신업%전추봉%의비%류사국
膜蛋白MraY%杆状病毒表达系统%间接免疫荧光
膜蛋白MraY%桿狀病毒錶達繫統%間接免疫熒光
막단백MraY%간상병독표체계통%간접면역형광
磷酸-N-乙酰胞壁酸酯-胸腺喷丁转位酶(MraY)是参与大肠杆菌细胞壁合成的一种膜蛋白.由于该蛋白不能通过大肠杆菌表达系统进行过表达制备重组蛋白,本研究采用杆状病毒表达系统,通过PCR从大肠杆菌基因组中扩增出目的基因MraY,纯化后克隆于pFastBac 1质粒中构建重组转移质粒pFastBac-MraY.将其转化DH10感受态,构建重组杆粒Bacmid-MraY,并转染于Sf9昆虫细胞中进行重组杆状病毒制备和目的蛋白表达,采用westem blot和间接免疫荧光鉴定结果表明,目的蛋白在昆中细胞Sf9中获得表达,分子量为41 ku并以可溶性形式表达.该蛋白的表达为MraY的高级结构的解析以及噬菌体溶菌机制的研究奠定了基础.
燐痠-N-乙酰胞壁痠酯-胸腺噴丁轉位酶(MraY)是參與大腸桿菌細胞壁閤成的一種膜蛋白.由于該蛋白不能通過大腸桿菌錶達繫統進行過錶達製備重組蛋白,本研究採用桿狀病毒錶達繫統,通過PCR從大腸桿菌基因組中擴增齣目的基因MraY,純化後剋隆于pFastBac 1質粒中構建重組轉移質粒pFastBac-MraY.將其轉化DH10感受態,構建重組桿粒Bacmid-MraY,併轉染于Sf9昆蟲細胞中進行重組桿狀病毒製備和目的蛋白錶達,採用westem blot和間接免疫熒光鑒定結果錶明,目的蛋白在昆中細胞Sf9中穫得錶達,分子量為41 ku併以可溶性形式錶達.該蛋白的錶達為MraY的高級結構的解析以及噬菌體溶菌機製的研究奠定瞭基礎.
린산-N-을선포벽산지-흉선분정전위매(MraY)시삼여대장간균세포벽합성적일충막단백.유우해단백불능통과대장간균표체계통진행과표체제비중조단백,본연구채용간상병독표체계통,통과PCR종대장간균기인조중확증출목적기인MraY,순화후극륭우pFastBac 1질립중구건중조전이질립pFastBac-MraY.장기전화DH10감수태,구건중조간립Bacmid-MraY,병전염우Sf9곤충세포중진행중조간상병독제비화목적단백표체,채용westem blot화간접면역형광감정결과표명,목적단백재곤중세포Sf9중획득표체,분자량위41 ku병이가용성형식표체.해단백적표체위MraY적고급결구적해석이급서균체용균궤제적연구전정료기출.
