中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2013年
5期
341-345
,共5页
尹曼曼%郭东伟%刘琴芳%张枫%张利杰%李江南%翁长江
尹曼曼%郭東偉%劉琴芳%張楓%張利傑%李江南%翁長江
윤만만%곽동위%류금방%장풍%장리걸%리강남%옹장강
猪繁殖与呼吸综合征病毒%N蛋白%BCCIP%相互作用
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%N蛋白%BCCIP%相互作用
저번식여호흡종합정병독%N단백%BCCIP%상호작용
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳(N)蛋白在病毒粒子组装和释放过程中发挥重要的作用.为筛选N蛋白与宿主细胞相互作用的蛋白,本研究分离健康猪肺泡巨噬细胞(PAM),构建了PAM的酵母cDNA文库,利用酵母双杂交方法筛选其中与PRRSV N蛋白相互作用的蛋白,结果获得3个阳性克隆.经测序并利用Blast方法比对GenBank数据库,筛选得到克隆插入的cDNA均与BCCIP (BRCA2 and CDKN1A interacting protein)基因的1 bp～396 bp核酸序列一致.经酵母回返验证试验、GST-pulldown和免疫共沉淀试验验证了N蛋白与BCCIP之间的特异性相互作用,共定位试验显示N蛋白与BCCIP共定位于细胞核和细胞浆中.本研究鉴定了新的与PRRSV N蛋白相互作用的宿主蛋白BCCIP,BCCIP是否通过与N蛋白的相互作用参与PRRSV复制还有待深入研究.
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)覈衣殼(N)蛋白在病毒粒子組裝和釋放過程中髮揮重要的作用.為篩選N蛋白與宿主細胞相互作用的蛋白,本研究分離健康豬肺泡巨噬細胞(PAM),構建瞭PAM的酵母cDNA文庫,利用酵母雙雜交方法篩選其中與PRRSV N蛋白相互作用的蛋白,結果穫得3箇暘性剋隆.經測序併利用Blast方法比對GenBank數據庫,篩選得到剋隆插入的cDNA均與BCCIP (BRCA2 and CDKN1A interacting protein)基因的1 bp～396 bp覈痠序列一緻.經酵母迴返驗證試驗、GST-pulldown和免疫共沉澱試驗驗證瞭N蛋白與BCCIP之間的特異性相互作用,共定位試驗顯示N蛋白與BCCIP共定位于細胞覈和細胞漿中.本研究鑒定瞭新的與PRRSV N蛋白相互作用的宿主蛋白BCCIP,BCCIP是否通過與N蛋白的相互作用參與PRRSV複製還有待深入研究.
저번식여호흡종합정병독(PRRSV)핵의각(N)단백재병독입자조장화석방과정중발휘중요적작용.위사선N단백여숙주세포상호작용적단백,본연구분리건강저폐포거서세포(PAM),구건료PAM적효모cDNA문고,이용효모쌍잡교방법사선기중여PRRSV N단백상호작용적단백,결과획득3개양성극륭.경측서병이용Blast방법비대GenBank수거고,사선득도극륭삽입적cDNA균여BCCIP (BRCA2 and CDKN1A interacting protein)기인적1 bp～396 bp핵산서렬일치.경효모회반험증시험、GST-pulldown화면역공침정시험험증료N단백여BCCIP지간적특이성상호작용,공정위시험현시N단백여BCCIP공정위우세포핵화세포장중.본연구감정료신적여PRRSV N단백상호작용적숙주단백BCCIP,BCCIP시부통과여N단백적상호작용삼여PRRSV복제환유대심입연구.
