国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2013年
8期
913-915,918
,共4页
蒋智文%郑慧玲%陈维春%刘新光
蔣智文%鄭慧玲%陳維春%劉新光
장지문%정혜령%진유춘%류신광
HeLa细胞%免疫印迹法%细胞周期
HeLa細胞%免疫印跡法%細胞週期
HeLa세포%면역인적법%세포주기
目的 构建AHA1的真核表达质粒,并在HeLa细胞中进行表达,然后检测过表达的AHA1重组蛋白对HeLa细胞周期的影响.方法 提取HeLa细胞中总RNA,逆转录成cDNA后,设计引物扩增AHA1基因的编码序列后构建到pCMV-HA真核表达载体中,转染HeLa细胞后使用HA标签抗体通过免疫印迹检测AHA1融合蛋白在细胞中的表达,最后分别使用流式细胞仪和CCK-8方法检测HeLa细胞的周期和增殖的变化.结果 pCMV-HA-AHA1重组质粒经PCR和DNA限制性内切酶酶切鉴定,最后通过DNA测序并经序列相似性比对,确定AHA1重组质粒构建成功；在HeLa细胞中转染pCMV-HA-AHA1重组质粒后,免疫印迹结果显示AHA1融合蛋白在细胞确已经实现过表达,经流式细胞仪和CCK-8方法检测发现,过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大.结论 成功构建了pCMV HA-AHA1重组质粒,并且在HeLa细胞成功过表达,且过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大.
目的 構建AHA1的真覈錶達質粒,併在HeLa細胞中進行錶達,然後檢測過錶達的AHA1重組蛋白對HeLa細胞週期的影響.方法 提取HeLa細胞中總RNA,逆轉錄成cDNA後,設計引物擴增AHA1基因的編碼序列後構建到pCMV-HA真覈錶達載體中,轉染HeLa細胞後使用HA標籤抗體通過免疫印跡檢測AHA1融閤蛋白在細胞中的錶達,最後分彆使用流式細胞儀和CCK-8方法檢測HeLa細胞的週期和增殖的變化.結果 pCMV-HA-AHA1重組質粒經PCR和DNA限製性內切酶酶切鑒定,最後通過DNA測序併經序列相似性比對,確定AHA1重組質粒構建成功；在HeLa細胞中轉染pCMV-HA-AHA1重組質粒後,免疫印跡結果顯示AHA1融閤蛋白在細胞確已經實現過錶達,經流式細胞儀和CCK-8方法檢測髮現,過錶達的AHA1蛋白對HeLa細胞的週期和增殖影響不大.結論 成功構建瞭pCMV HA-AHA1重組質粒,併且在HeLa細胞成功過錶達,且過錶達的AHA1蛋白對HeLa細胞的週期和增殖影響不大.
목적 구건AHA1적진핵표체질립,병재HeLa세포중진행표체,연후검측과표체적AHA1중조단백대HeLa세포주기적영향.방법 제취HeLa세포중총RNA,역전록성cDNA후,설계인물확증AHA1기인적편마서렬후구건도pCMV-HA진핵표체재체중,전염HeLa세포후사용HA표첨항체통과면역인적검측AHA1융합단백재세포중적표체,최후분별사용류식세포의화CCK-8방법검측HeLa세포적주기화증식적변화.결과 pCMV-HA-AHA1중조질립경PCR화DNA한제성내절매매절감정,최후통과DNA측서병경서렬상사성비대,학정AHA1중조질립구건성공；재HeLa세포중전염pCMV-HA-AHA1중조질립후,면역인적결과현시AHA1융합단백재세포학이경실현과표체,경류식세포의화CCK-8방법검측발현,과표체적AHA1단백대HeLa세포적주기화증식영향불대.결론 성공구건료pCMV HA-AHA1중조질립,병차재HeLa세포성공과표체,차과표체적AHA1단백대HeLa세포적주기화증식영향불대.
