医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2013年
11期
58-61
,共4页
戴大鹏%李传保%王双虎%耿培武%胡国新%蔡剑平
戴大鵬%李傳保%王雙虎%耿培武%鬍國新%蔡劍平
대대붕%리전보%왕쌍호%경배무%호국신%채검평
CYP2C9%新突变体%体外酶活性研究%慢代谢
CYP2C9%新突變體%體外酶活性研究%慢代謝
CYP2C9%신돌변체%체외매활성연구%만대사
CYP2C9%Novel mutation%In vitro%Enzymatic activity%Slow metabolizer
目的 对CYP2C9基因新突变体(CYP2C9* 58型)开展体外酶学功能研究,明确其代谢活性与野生型的相关性.方法 以CYP2C9基因cDNA为模板,通过定点诱变方法获得CYP2C9各变异体的cDNA全长,用以构建昆虫表达载体.利用杆状病毒包装试剂盒包装昆虫病毒,侵染sf21昆虫细胞后获得高效表达CYP2C9各型蛋白的微粒体.以甲苯磺丁脲为探针底物药,利用获得的微粒体体外测定各变异体的最大反应速率Vmax和米氏常数Km,评价其主要酶促动力学特性.结果 成功构建了CYP2C9*l、CYP2C9*2、CYP2C9*3和CYP2C9* 58型4种CYP2C9昆虫表达载体,Western blot证实该载体可用于稳定表达相应的CYP2C9突变体.CYP2C9*2、CYP2C9*3和CYP2C9* 58型变异体的体外酶学活性分别为野生型CYP2C9*l的91.6％,13.5％和23.1％.结论 CYP2C9* 58型的酶学活性较野生型明显降低,接近于典型缺陷型突变体CYP2C9*3型,提示携带此突变型的患者在服用经由CYP2C9代谢的相关药物时,药物代谢速度较野生型携带者会有一定程度的降低.
目的 對CYP2C9基因新突變體(CYP2C9* 58型)開展體外酶學功能研究,明確其代謝活性與野生型的相關性.方法 以CYP2C9基因cDNA為模闆,通過定點誘變方法穫得CYP2C9各變異體的cDNA全長,用以構建昆蟲錶達載體.利用桿狀病毒包裝試劑盒包裝昆蟲病毒,侵染sf21昆蟲細胞後穫得高效錶達CYP2C9各型蛋白的微粒體.以甲苯磺丁脲為探針底物藥,利用穫得的微粒體體外測定各變異體的最大反應速率Vmax和米氏常數Km,評價其主要酶促動力學特性.結果 成功構建瞭CYP2C9*l、CYP2C9*2、CYP2C9*3和CYP2C9* 58型4種CYP2C9昆蟲錶達載體,Western blot證實該載體可用于穩定錶達相應的CYP2C9突變體.CYP2C9*2、CYP2C9*3和CYP2C9* 58型變異體的體外酶學活性分彆為野生型CYP2C9*l的91.6％,13.5％和23.1％.結論 CYP2C9* 58型的酶學活性較野生型明顯降低,接近于典型缺陷型突變體CYP2C9*3型,提示攜帶此突變型的患者在服用經由CYP2C9代謝的相關藥物時,藥物代謝速度較野生型攜帶者會有一定程度的降低.
목적 대CYP2C9기인신돌변체(CYP2C9* 58형)개전체외매학공능연구,명학기대사활성여야생형적상관성.방법 이CYP2C9기인cDNA위모판,통과정점유변방법획득CYP2C9각변이체적cDNA전장,용이구건곤충표체재체.이용간상병독포장시제합포장곤충병독,침염sf21곤충세포후획득고효표체CYP2C9각형단백적미립체.이갑분광정뇨위탐침저물약,이용획득적미립체체외측정각변이체적최대반응속솔Vmax화미씨상수Km,평개기주요매촉동역학특성.결과 성공구건료CYP2C9*l、CYP2C9*2、CYP2C9*3화CYP2C9* 58형4충CYP2C9곤충표체재체,Western blot증실해재체가용우은정표체상응적CYP2C9돌변체.CYP2C9*2、CYP2C9*3화CYP2C9* 58형변이체적체외매학활성분별위야생형CYP2C9*l적91.6％,13.5％화23.1％.결론 CYP2C9* 58형적매학활성교야생형명현강저,접근우전형결함형돌변체CYP2C9*3형,제시휴대차돌변형적환자재복용경유CYP2C9대사적상관약물시,약물대사속도교야생형휴대자회유일정정도적강저.
