CAJ | 학술논문

为了实现米黑霉脂肪酶(Rhizomucor miehei Lipase,RML)基因在大肠杆菌中的高效表达,并得到大量的具有生物活性的脂肪酶,首先通过3种方式提高RML在大肠杆菌中可溶性蛋白的表达量:1)低温诱导(16℃)RML表达；2)新型分子伴侣(Skp)与RML N端融合表达；3)载体pET32a上的Trx·tag与RML N端融合表达.其次对各蛋白质进行纯化及活性测定,各种条件得到的RML比活在(226±10～247±10) U/mg.蛋白质表达结果显示:经低温诱导RML的效果最好,纯蛋白质量浓度为0.86 mg/mL,表明诱导温度是影响可溶性蛋白质表达量的关键因素；活性测定结果表明,Skp和Trx· tag与目的基因N端的融合没有影响RML活性中心(C末端)对底物的结合和催化能力.因此,RML不仅在大肠杆菌中得到高效表达,并且保持原有生物学活性,在工业生产中有应用价值.
위료실현미흑매지방매(Rhizomucor miehei Lipase,RML)기인재대장간균중적고효표체,병득도대량적구유생물활성적지방매,수선통과3충방식제고RML재대장간균중가용성단백적표체량:1)저온유도(16℃)RML표체；2)신형분자반려(Skp)여RML N단융합표체；3)재체pET32a상적Trx·tag여RML N단융합표체.기차대각단백질진행순화급활성측정,각충조건득도적RML비활재(226±10～247±10) U/mg.단백질표체결과현시:경저온유도RML적효과최호,순단백질량농도위0.86 mg/mL,표명유도온도시영향가용성단백질표체량적관건인소；활성측정결과표명,Skp화Trx· tag여목적기인N단적융합몰유영향RML활성중심(C말단)대저물적결합화최화능력.인차,RML불부재대장간균중득도고효표체,병차보지원유생물학활성,재공업생산중유응용개치.