CAJ | 학술논문

试验利用Trizol法从鸡肠道组织提取总RNA,采用特异性引物通过RT-PCR扩增出α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(α-2,3-sialyltransferase Ⅰ,ST3GAL Ⅰ)基因的cDNA片段,并将其克隆至pGEM-T easy载体,获得阳性重组质粒,再以阳性重组质粒为模板亚克隆ST3GALⅠ基因的完整ORF区,定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,进行PCR、限制性酶切和DNA序列分析鉴定.结果表明,ST3GAL Ⅰ基因全长1029 bp,测序结果同GenBank数据库收录的序列一致,无任何密码子缺失与突变,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上的目的基因大小方向均正确.本研究成功构建了pcDNA3.1(+)一ST3GALⅠ真核表达载体,为下一步的真核表达及对ST3GAL Ⅰ基因的功能研究奠定了基础.
시험이용Trizol법종계장도조직제취총RNA,채용특이성인물통과RT-PCR확증출α-2,3-타액산전이매Ⅰ(α-2,3-sialyltransferase Ⅰ,ST3GAL Ⅰ)기인적cDNA편단,병장기극륭지pGEM-T easy재체,획득양성중조질립,재이양성중조질립위모판아극륭ST3GALⅠ기인적완정ORF구,정향삽입도진핵표체재체pcDNA3.1(+)상,진행PCR、한제성매절화DNA서렬분석감정.결과표명,ST3GAL Ⅰ기인전장1029 bp,측서결과동GenBank수거고수록적서렬일치,무임하밀마자결실여돌변,삽입도진핵표체재체pcDNA3.1(+)상적목적기인대소방향균정학.본연구성공구건료pcDNA3.1(+)일ST3GALⅠ진핵표체재체,위하일보적진핵표체급대ST3GAL Ⅰ기인적공능연구전정료기출.