浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2013年
1期
31-36
,共6页
唐永凯%俞菊华%徐跑%李建林%李红霞%董在杰%任洪涛
唐永凱%俞菊華%徐跑%李建林%李紅霞%董在傑%任洪濤
당영개%유국화%서포%리건림%리홍하%동재걸%임홍도
建鲤%内参基因%β-actin%实时荧光定量PCR
建鯉%內參基因%β-actin%實時熒光定量PCR
건리%내삼기인%β-actin%실시형광정량PCR
β-actin在真核细胞的生理过程中起着重要的作用,其表达范围广、表达量恒定,常作为内参基因应用于real time PCR中.本文通过RT-PCR克隆出建鲤(Cyprinus carpio var.jian) β-actin的部分cDNA序列,其长度为424 bp,翻译成138个氨基酸,计算的蛋白质分子量为15.4 ku.氨基酸同源性分析显示,建鲤β-actin与斑马鱼(Danio rerio)相似性最高,为99.3％.与其他鱼的相似性也较高,为97.8％～98.6％.同时也克隆出了建鲤β-actin相应的DNA序列,其长度为590 bp.cDNA和DNA的序列比对显示克隆出的建鲤β-actin含有2个内含子,设计一对跨越内含子的引物,采用SYBR Green Ⅰ染料建立了real time PCR方法.以肝脏cDNA为标准品,建立了标准曲线,并进行了溶解曲线分析.结果表明,所建立的方法具有特异性强、相关系数高、线性范围广等优点,可应用于建鲤的功能基因表达研究.
β-actin在真覈細胞的生理過程中起著重要的作用,其錶達範圍廣、錶達量恆定,常作為內參基因應用于real time PCR中.本文通過RT-PCR剋隆齣建鯉(Cyprinus carpio var.jian) β-actin的部分cDNA序列,其長度為424 bp,翻譯成138箇氨基痠,計算的蛋白質分子量為15.4 ku.氨基痠同源性分析顯示,建鯉β-actin與斑馬魚(Danio rerio)相似性最高,為99.3％.與其他魚的相似性也較高,為97.8％～98.6％.同時也剋隆齣瞭建鯉β-actin相應的DNA序列,其長度為590 bp.cDNA和DNA的序列比對顯示剋隆齣的建鯉β-actin含有2箇內含子,設計一對跨越內含子的引物,採用SYBR Green Ⅰ染料建立瞭real time PCR方法.以肝髒cDNA為標準品,建立瞭標準麯線,併進行瞭溶解麯線分析.結果錶明,所建立的方法具有特異性彊、相關繫數高、線性範圍廣等優點,可應用于建鯉的功能基因錶達研究.
β-actin재진핵세포적생리과정중기착중요적작용,기표체범위엄、표체량항정,상작위내삼기인응용우real time PCR중.본문통과RT-PCR극륭출건리(Cyprinus carpio var.jian) β-actin적부분cDNA서렬,기장도위424 bp,번역성138개안기산,계산적단백질분자량위15.4 ku.안기산동원성분석현시,건리β-actin여반마어(Danio rerio)상사성최고,위99.3％.여기타어적상사성야교고,위97.8％～98.6％.동시야극륭출료건리β-actin상응적DNA서렬,기장도위590 bp.cDNA화DNA적서렬비대현시극륭출적건리β-actin함유2개내함자,설계일대과월내함자적인물,채용SYBR Green Ⅰ염료건립료real time PCR방법.이간장cDNA위표준품,건립료표준곡선,병진행료용해곡선분석.결과표명,소건립적방법구유특이성강、상관계수고、선성범위엄등우점,가응용우건리적공능기인표체연구.
