浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2013年
1期
21-26
,共6页
申世川%王一成%袁秀芳%徐丽华%李军星
申世川%王一成%袁秀芳%徐麗華%李軍星
신세천%왕일성%원수방%서려화%리군성
猪圆环病毒2型%环介导等温扩增%可视化%快速检测
豬圓環病毒2型%環介導等溫擴增%可視化%快速檢測
저원배병독2형%배개도등온확증%가시화%쾌속검측
基于猪圆环病毒2型(porcine circocirus type 2,PCV-2)的ORF2基因建立了一种便捷、灵敏而又特异的可视化环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法.该方法通过针对PCV-2 6个位点的4条特异性引物,在Bst DNA聚合酶的作用下对PCV-2靶序列进行等温核酸扩增.经过对LAMP反应体系和反应条件的优化,所建立方法在61℃反应lh能够成功的检测出PCV-2基因组DNA,且操作简单,不需要PCR仪等复杂仪器,结果可经电泳检测及肉眼观察；敏感性和特异性试验表明,所建立的方法能特异地检测PCV-2并且其敏感度可以达到0.5 pg的DNA分子；所建立LAMP方法的阳性检出率与国标PCR的阳性检出率符合度为100％.该研究为PCV-2的现场快速检测提供更加简便、快捷的方法,可以满足基层检疫的需要.
基于豬圓環病毒2型(porcine circocirus type 2,PCV-2)的ORF2基因建立瞭一種便捷、靈敏而又特異的可視化環介導等溫覈痠擴增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法.該方法通過針對PCV-2 6箇位點的4條特異性引物,在Bst DNA聚閤酶的作用下對PCV-2靶序列進行等溫覈痠擴增.經過對LAMP反應體繫和反應條件的優化,所建立方法在61℃反應lh能夠成功的檢測齣PCV-2基因組DNA,且操作簡單,不需要PCR儀等複雜儀器,結果可經電泳檢測及肉眼觀察；敏感性和特異性試驗錶明,所建立的方法能特異地檢測PCV-2併且其敏感度可以達到0.5 pg的DNA分子；所建立LAMP方法的暘性檢齣率與國標PCR的暘性檢齣率符閤度為100％.該研究為PCV-2的現場快速檢測提供更加簡便、快捷的方法,可以滿足基層檢疫的需要.
기우저원배병독2형(porcine circocirus type 2,PCV-2)적ORF2기인건립료일충편첩、령민이우특이적가시화배개도등온핵산확증(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)방법.해방법통과침대PCV-2 6개위점적4조특이성인물,재Bst DNA취합매적작용하대PCV-2파서렬진행등온핵산확증.경과대LAMP반응체계화반응조건적우화,소건립방법재61℃반응lh능구성공적검측출PCV-2기인조DNA,차조작간단,불수요PCR의등복잡의기,결과가경전영검측급육안관찰；민감성화특이성시험표명,소건립적방법능특이지검측PCV-2병차기민감도가이체도0.5 pg적DNA분자；소건립LAMP방법적양성검출솔여국표PCR적양성검출솔부합도위100％.해연구위PCV-2적현장쾌속검측제공경가간편、쾌첩적방법,가이만족기층검역적수요.
