食品与生物技术学报
食品與生物技術學報
식품여생물기술학보
JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
2013年
1期
15-21
,共7页
潘晓霞%李静静%何文森%李大力%贾承胜%张晓鸣%冯骉
潘曉霞%李靜靜%何文森%李大力%賈承勝%張曉鳴%馮骉
반효하%리정정%하문삼%리대력%가승성%장효명%풍표
基因克隆%苯乙酮酸脱羧酶%乙基香兰素%生物转化%静息细胞
基因剋隆%苯乙酮痠脫羧酶%乙基香蘭素%生物轉化%靜息細胞
기인극륭%분을동산탈최매%을기향란소%생물전화%정식세포
对恶臭假单胞杆菌(Pseudomonas putida ATCC12633)中的苯乙酮酸脱羧酶基因mdlC进行克隆,导入质粒载体pET28a中,将构建得到的重组质粒pET28a-mdlC转化于宿主细胞E.coliBL21 (DE3),重组大肠杆菌E.coli BL21 (DE3) (pET28a-mdlC)经IPTG诱导,SDS-PAGE分析得到相对分子质量约为57 000的蛋白质条带.将E.coli BL21 (DE3)(pET28a-mdlC)和E.coli BL21(DE3) (pET30a-mdlB)两株重组菌以混合静息细胞的形式作为生物催化剂,利用各自胞内的重组酶对3-乙氧基-4-羟基苯乙醇酸(乙基扁桃酸)脱氢氧化、脱羧合成乙基香兰素.未经优化,催化24 h后反应液中乙基香兰素的质量浓度可达1.94 g/L,且没有副产物产生.同时研究表明,该混合静息细胞重复使用3次能保持90％以上的催化活力,还有效缩短了反应时间.
對噁臭假單胞桿菌(Pseudomonas putida ATCC12633)中的苯乙酮痠脫羧酶基因mdlC進行剋隆,導入質粒載體pET28a中,將構建得到的重組質粒pET28a-mdlC轉化于宿主細胞E.coliBL21 (DE3),重組大腸桿菌E.coli BL21 (DE3) (pET28a-mdlC)經IPTG誘導,SDS-PAGE分析得到相對分子質量約為57 000的蛋白質條帶.將E.coli BL21 (DE3)(pET28a-mdlC)和E.coli BL21(DE3) (pET30a-mdlB)兩株重組菌以混閤靜息細胞的形式作為生物催化劑,利用各自胞內的重組酶對3-乙氧基-4-羥基苯乙醇痠(乙基扁桃痠)脫氫氧化、脫羧閤成乙基香蘭素.未經優化,催化24 h後反應液中乙基香蘭素的質量濃度可達1.94 g/L,且沒有副產物產生.同時研究錶明,該混閤靜息細胞重複使用3次能保持90％以上的催化活力,還有效縮短瞭反應時間.
대악취가단포간균(Pseudomonas putida ATCC12633)중적분을동산탈최매기인mdlC진행극륭,도입질립재체pET28a중,장구건득도적중조질립pET28a-mdlC전화우숙주세포E.coliBL21 (DE3),중조대장간균E.coli BL21 (DE3) (pET28a-mdlC)경IPTG유도,SDS-PAGE분석득도상대분자질량약위57 000적단백질조대.장E.coli BL21 (DE3)(pET28a-mdlC)화E.coli BL21(DE3) (pET30a-mdlB)량주중조균이혼합정식세포적형식작위생물최화제,이용각자포내적중조매대3-을양기-4-간기분을순산(을기편도산)탈경양화、탈최합성을기향란소.미경우화,최화24 h후반응액중을기향란소적질량농도가체1.94 g/L,차몰유부산물산생.동시연구표명,해혼합정식세포중복사용3차능보지90％이상적최화활력,환유효축단료반응시간.
