四川大学学报（自然科学版）
四川大學學報（自然科學版）
사천대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
2013年
1期
187-192
,共6页
赵长宏%陈斌%吴传芳%欧阳劲%秦岭
趙長宏%陳斌%吳傳芳%歐暘勁%秦嶺
조장굉%진빈%오전방%구양경%진령
CDK10%蛋白纯化%细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶%银染
CDK10%蛋白純化%細胞週期蛋白依賴性蛋白激酶%銀染
CDK10%단백순화%세포주기단백의뢰성단백격매%은염
通过半定量RT-PCR (reverse transcriptase PCR)检测了CDK10在人胚胎肾细胞(HEK293)、人宫颈癌细胞(HeLa)、人乳腺癌细胞(MCF7)中的表达水平,克隆并构建了全长CDK10基因的真核表达质粒.在HEK293中筛选得到了稳定表达CDK10-Flag的细胞系,大规模培养该细胞系,分离细胞核、细胞质提取物,在非变性条件下利用anti-Flag抗体免疫共沉淀(Immunopreeipitation,IP),银染及蛋白质免疫印迹检测结果表明分离到CDK10蛋白及与其可能结合的其它蛋白,为质谱(Mass Spectrum,MS)鉴定提供材料.
通過半定量RT-PCR (reverse transcriptase PCR)檢測瞭CDK10在人胚胎腎細胞(HEK293)、人宮頸癌細胞(HeLa)、人乳腺癌細胞(MCF7)中的錶達水平,剋隆併構建瞭全長CDK10基因的真覈錶達質粒.在HEK293中篩選得到瞭穩定錶達CDK10-Flag的細胞繫,大規模培養該細胞繫,分離細胞覈、細胞質提取物,在非變性條件下利用anti-Flag抗體免疫共沉澱(Immunopreeipitation,IP),銀染及蛋白質免疫印跡檢測結果錶明分離到CDK10蛋白及與其可能結閤的其它蛋白,為質譜(Mass Spectrum,MS)鑒定提供材料.
통과반정량RT-PCR (reverse transcriptase PCR)검측료CDK10재인배태신세포(HEK293)、인궁경암세포(HeLa)、인유선암세포(MCF7)중적표체수평,극륭병구건료전장CDK10기인적진핵표체질립.재HEK293중사선득도료은정표체CDK10-Flag적세포계,대규모배양해세포계,분리세포핵、세포질제취물,재비변성조건하이용anti-Flag항체면역공침정(Immunopreeipitation,IP),은염급단백질면역인적검측결과표명분리도CDK10단백급여기가능결합적기타단백,위질보(Mass Spectrum,MS)감정제공재료.
