目的:探讨温阳补肾药对骨髓间充质干细胞凋亡的影响及作用机制.方法:建立白细胞介素1β诱导体外培养的SD大鼠骨髓间充质干细胞凋亡体系,分别向其中加入巴戟天含药血清(A组)、鹿角胶合药血清(B组)、淫羊藿含药血清(C组)、骨碎补含药血清(D组)和空白血清(F组),E组不加入血清.各组细胞培养48 h后,采用RT-PCR法检测bcl-2和Bax的mRNA表达量,采用电泳法检测骨髓间充质干细胞凋亡体系的建立,采用Western Blot法检测bcl-2和Bax的蛋白表达量.结果:①骨髓间充质干细胞表面标记结果.流式细胞仪检测结果显示CD34、CD45表达阴性,CD90表达阳性.②bcl-2和Bax的mRNA表达量.各组bcl-2mRNA表达量比较,差异有统计学意义(22.25±1.15,15.18±1.51,15.36 ±0.72,16.12±0.95,16.79±1.39,16.02±1.14；F=182.000,P=0.000).A组bcl-2mRNA表达量高于B组、C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)；E组高于B组(P =0.030).各组BaxmRNA表达量比较,差异有统计学意义(19.17±0.67,15.37±1.02,18.18±0.23,17.37±0.72,28.36±0.93,23.52±1.26;F =28.422,P=0.000).A组BaxmRNA表达量高于B组和D组(P =0.001,P=0.018),低于E组(P =0.001)；B组低于C组、E组和F组(P=0.013,P=0.000,P=0.000),B组与D组比较,差异无统计学意义(P =0.052)；D组低于F组(P =0.000)；E组高于C组和F组(P=0.000,P=0.000).③bcl-2DNA和BaxDNA电泳结果.电泳图谱显示,E组条带与A组、B组、C组、D组有明显差异.④bcl-2和Bax的蛋白表达量.各组bcl-2蛋白表达量比较,差异有统计学意义(11 526.18±697.38,20 096.88±953.73,16 784.88±504.36,14 856.65±546.90,8 549.29±313.63,9 004.79±399.12;F =341.740,P=0.000).A组bcl-2蛋白表达量低于B组、C组和D组(P=0.000,P=0.000,P=0.000),高于E组和F组(P=0.000,P=0.000)；B组高于C组、D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)；C组高于D组、E组和F组(P=0.000,P=0.000,P=0.000)；D组高于E组和F组(P=0.000,P=0.000).各组Bax蛋白表达量比较,差异有统计学意义(12 435.09±1002.35,4 590.96±71.45,11 721.90±855.08,10 393.54±662.79,13 874.83±541.16,12 774.15±674.40;F=136.305,P=0.000).A组Bax蛋白表达量高于B组和D组(P=0.000,P=0.039)；B组低于C组、D组、E组和F组(P=0.000,P =0.000,P=0.000,P=0.000)；C组低于E组(P =0.010)；D组低于E组和F组(P=0.000,P=0.002).结论:温阳补肾药含药血清有对抗白细胞介素1β诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的作用,其机制主要是上调抑制凋亡基因Bcl-2的表达,下调促进凋亡基因Bax的表达,抑制其蛋白酶活性从而降低细胞凋亡率.
目的:探討溫暘補腎藥對骨髓間充質榦細胞凋亡的影響及作用機製.方法:建立白細胞介素1β誘導體外培養的SD大鼠骨髓間充質榦細胞凋亡體繫,分彆嚮其中加入巴戟天含藥血清(A組)、鹿角膠閤藥血清(B組)、淫羊藿含藥血清(C組)、骨碎補含藥血清(D組)和空白血清(F組),E組不加入血清.各組細胞培養48 h後,採用RT-PCR法檢測bcl-2和Bax的mRNA錶達量,採用電泳法檢測骨髓間充質榦細胞凋亡體繫的建立,採用Western Blot法檢測bcl-2和Bax的蛋白錶達量.結果:①骨髓間充質榦細胞錶麵標記結果.流式細胞儀檢測結果顯示CD34、CD45錶達陰性,CD90錶達暘性.②bcl-2和Bax的mRNA錶達量.各組bcl-2mRNA錶達量比較,差異有統計學意義(22.25±1.15,15.18±1.51,15.36 ±0.72,16.12±0.95,16.79±1.39,16.02±1.14；F=182.000,P=0.000).A組bcl-2mRNA錶達量高于B組、C組、D組、E組和F組(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)；E組高于B組(P =0.030).各組BaxmRNA錶達量比較,差異有統計學意義(19.17±0.67,15.37±1.02,18.18±0.23,17.37±0.72,28.36±0.93,23.52±1.26;F =28.422,P=0.000).A組BaxmRNA錶達量高于B組和D組(P =0.001,P=0.018),低于E組(P =0.001)；B組低于C組、E組和F組(P=0.013,P=0.000,P=0.000),B組與D組比較,差異無統計學意義(P =0.052)；D組低于F組(P =0.000)；E組高于C組和F組(P=0.000,P=0.000).③bcl-2DNA和BaxDNA電泳結果.電泳圖譜顯示,E組條帶與A組、B組、C組、D組有明顯差異.④bcl-2和Bax的蛋白錶達量.各組bcl-2蛋白錶達量比較,差異有統計學意義(11 526.18±697.38,20 096.88±953.73,16 784.88±504.36,14 856.65±546.90,8 549.29±313.63,9 004.79±399.12;F =341.740,P=0.000).A組bcl-2蛋白錶達量低于B組、C組和D組(P=0.000,P=0.000,P=0.000),高于E組和F組(P=0.000,P=0.000)；B組高于C組、D組、E組和F組(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)；C組高于D組、E組和F組(P=0.000,P=0.000,P=0.000)；D組高于E組和F組(P=0.000,P=0.000).各組Bax蛋白錶達量比較,差異有統計學意義(12 435.09±1002.35,4 590.96±71.45,11 721.90±855.08,10 393.54±662.79,13 874.83±541.16,12 774.15±674.40;F=136.305,P=0.000).A組Bax蛋白錶達量高于B組和D組(P=0.000,P=0.039)；B組低于C組、D組、E組和F組(P=0.000,P =0.000,P=0.000,P=0.000)；C組低于E組(P =0.010)；D組低于E組和F組(P=0.000,P=0.002).結論:溫暘補腎藥含藥血清有對抗白細胞介素1β誘導的骨髓間充質榦細胞凋亡的作用,其機製主要是上調抑製凋亡基因Bcl-2的錶達,下調促進凋亡基因Bax的錶達,抑製其蛋白酶活性從而降低細胞凋亡率.
목적:탐토온양보신약대골수간충질간세포조망적영향급작용궤제.방법:건립백세포개소1β유도체외배양적SD대서골수간충질간세포조망체계,분별향기중가입파극천함약혈청(A조)、록각효합약혈청(B조)、음양곽함약혈청(C조)、골쇄보함약혈청(D조)화공백혈청(F조),E조불가입혈청.각조세포배양48 h후,채용RT-PCR법검측bcl-2화Bax적mRNA표체량,채용전영법검측골수간충질간세포조망체계적건립,채용Western Blot법검측bcl-2화Bax적단백표체량.결과:①골수간충질간세포표면표기결과.류식세포의검측결과현시CD34、CD45표체음성,CD90표체양성.②bcl-2화Bax적mRNA표체량.각조bcl-2mRNA표체량비교,차이유통계학의의(22.25±1.15,15.18±1.51,15.36 ±0.72,16.12±0.95,16.79±1.39,16.02±1.14；F=182.000,P=0.000).A조bcl-2mRNA표체량고우B조、C조、D조、E조화F조(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)；E조고우B조(P =0.030).각조BaxmRNA표체량비교,차이유통계학의의(19.17±0.67,15.37±1.02,18.18±0.23,17.37±0.72,28.36±0.93,23.52±1.26;F =28.422,P=0.000).A조BaxmRNA표체량고우B조화D조(P =0.001,P=0.018),저우E조(P =0.001)；B조저우C조、E조화F조(P=0.013,P=0.000,P=0.000),B조여D조비교,차이무통계학의의(P =0.052)；D조저우F조(P =0.000)；E조고우C조화F조(P=0.000,P=0.000).③bcl-2DNA화BaxDNA전영결과.전영도보현시,E조조대여A조、B조、C조、D조유명현차이.④bcl-2화Bax적단백표체량.각조bcl-2단백표체량비교,차이유통계학의의(11 526.18±697.38,20 096.88±953.73,16 784.88±504.36,14 856.65±546.90,8 549.29±313.63,9 004.79±399.12;F =341.740,P=0.000).A조bcl-2단백표체량저우B조、C조화D조(P=0.000,P=0.000,P=0.000),고우E조화F조(P=0.000,P=0.000)；B조고우C조、D조、E조화F조(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)；C조고우D조、E조화F조(P=0.000,P=0.000,P=0.000)；D조고우E조화F조(P=0.000,P=0.000).각조Bax단백표체량비교,차이유통계학의의(12 435.09±1002.35,4 590.96±71.45,11 721.90±855.08,10 393.54±662.79,13 874.83±541.16,12 774.15±674.40;F=136.305,P=0.000).A조Bax단백표체량고우B조화D조(P=0.000,P=0.039)；B조저우C조、D조、E조화F조(P=0.000,P =0.000,P=0.000,P=0.000)；C조저우E조(P =0.010)；D조저우E조화F조(P=0.000,P=0.002).결론:온양보신약함약혈청유대항백세포개소1β유도적골수간충질간세포조망적작용,기궤제주요시상조억제조망기인Bcl-2적표체,하조촉진조망기인Bax적표체,억제기단백매활성종이강저세포조망솔.
