CAJ | 학술논문

根据草鱼呼肠孤病毒广东株GCRV-GD108编码VP5的M5基因的cDNA序列,分别设计合成带特定酶切位点的特异引物,进行PCR扩增；通过酶切与连接,构建2种重组表达载体pET30c-M5和pColdⅡ-M5,分别转化于大肠杆菌并进行诱导表达；对培养基、诱导时间、诱导剂浓度和温度等条件进行优化,确定最适表达体系.通过SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.结果显示,所构建的2种VP5蛋白原核表达载体,均在大肠杆菌中成功表达了分子质量大小(约80 ku)与预期相符的重组蛋白,表达产物主要存在于包涵体中.诱导表达后的菌体经离心、洗涤与超声破碎,离心收集包涵体.包涵体通过变性、透析与复性,获得纯化的重组蛋白,其中pET30c-M5/BL21 (DE3) 工程菌的目的蛋白占全菌蛋白的22.5％,纯化后获得了高纯度的重组蛋白(＞95％).比较2种表达载体的表达结果,pET30c-M5具有诱导表达耗时少、获得重组蛋白量大的优势,可为下一步的研究提供足量的蛋白.
근거초어호장고병독엄동주GCRV-GD108편마VP5적M5기인적cDNA서렬,분별설계합성대특정매절위점적특이인물,진행PCR확증；통과매절여련접,구건2충중조표체재체pET30c-M5화pColdⅡ-M5,분별전화우대장간균병진행유도표체；대배양기、유도시간、유도제농도화온도등조건진행우화,학정최괄표체체계.통과SDS-PAGE화Western blot대표체산물진행감정.결과현시,소구건적2충VP5단백원핵표체재체,균재대장간균중성공표체료분자질량대소(약80 ku)여예기상부적중조단백,표체산물주요존재우포함체중.유도표체후적균체경리심、세조여초성파쇄,리심수집포함체.포함체통과변성、투석여복성,획득순화적중조단백,기중pET30c-M5/BL21 (DE3) 공정균적목적단백점전균단백적22.5％,순화후획득료고순도적중조단백(＞95％).비교2충표체재체적표체결과,pET30c-M5구유유도표체모시소、획득중조단백량대적우세,가위하일보적연구제공족량적단백.