重庆理工大学学报（自然科学版）
重慶理工大學學報（自然科學版）
중경리공대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF CHONGQING INSTITUTE OF TECHNOLOGY
2013年
2期
23-27
,共5页
蔡家利%户国达%孙加燕%尹忠宝%张存亮%陈文毫
蔡傢利%戶國達%孫加燕%尹忠寶%張存亮%陳文毫
채가리%호국체%손가연%윤충보%장존량%진문호
猪α-干扰素%基因工程药物%生物药物%兽药
豬α-榦擾素%基因工程藥物%生物藥物%獸藥
저α-간우소%기인공정약물%생물약물%수약
使用原核表达系统可溶性表达猪α-干扰素,并进行纯化和鉴定.根据Gene Bank中报道的猪α-干扰素成熟肽基因序列设计引物,以猪肝脏细胞基因组DNA为模板,用PCR方法扩增猪α-干扰素成熟肽基因,并将其定向克隆到原核表达载体pET32a+中,转化大肠杆菌DH5a.阳性克隆经PCR鉴定、双酶切鉴定以及测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21进行诱导表达.对表达产物进行SDS-PAGE分析、镍柱亲和层析纯化、Western-blot鉴定.结果表明:成功构建了猪α-干扰素原核表达载体pET32a+-poIFN-α；表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约3.8 ×104的位置出现了目的蛋白条带,与预期相符；Western-blot鉴定显示有特异性条带出现.实现了重组猪α-干扰素的可溶性表达,获得了纯度较高的重组猪α-干扰素,为进一步研究其药物作用奠定了基础.
使用原覈錶達繫統可溶性錶達豬α-榦擾素,併進行純化和鑒定.根據Gene Bank中報道的豬α-榦擾素成熟肽基因序列設計引物,以豬肝髒細胞基因組DNA為模闆,用PCR方法擴增豬α-榦擾素成熟肽基因,併將其定嚮剋隆到原覈錶達載體pET32a+中,轉化大腸桿菌DH5a.暘性剋隆經PCR鑒定、雙酶切鑒定以及測序鑒定後,轉入大腸桿菌BL21進行誘導錶達.對錶達產物進行SDS-PAGE分析、鎳柱親和層析純化、Western-blot鑒定.結果錶明:成功構建瞭豬α-榦擾素原覈錶達載體pET32a+-poIFN-α；錶達產物經SDS-PAGE分析,在相對分子質量約3.8 ×104的位置齣現瞭目的蛋白條帶,與預期相符；Western-blot鑒定顯示有特異性條帶齣現.實現瞭重組豬α-榦擾素的可溶性錶達,穫得瞭純度較高的重組豬α-榦擾素,為進一步研究其藥物作用奠定瞭基礎.
사용원핵표체계통가용성표체저α-간우소,병진행순화화감정.근거Gene Bank중보도적저α-간우소성숙태기인서렬설계인물,이저간장세포기인조DNA위모판,용PCR방법확증저α-간우소성숙태기인,병장기정향극륭도원핵표체재체pET32a+중,전화대장간균DH5a.양성극륭경PCR감정、쌍매절감정이급측서감정후,전입대장간균BL21진행유도표체.대표체산물진행SDS-PAGE분석、얼주친화층석순화、Western-blot감정.결과표명:성공구건료저α-간우소원핵표체재체pET32a+-poIFN-α；표체산물경SDS-PAGE분석,재상대분자질량약3.8 ×104적위치출현료목적단백조대,여예기상부；Western-blot감정현시유특이성조대출현.실현료중조저α-간우소적가용성표체,획득료순도교고적중조저α-간우소,위진일보연구기약물작용전정료기출.
