畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2013年
3期
66-69
,共4页
孙伟%范红结%徐正军%高升
孫偉%範紅結%徐正軍%高升
손위%범홍결%서정군%고승
猪圆环病毒2型%Cap蛋白%表达%纯化%鉴定
豬圓環病毒2型%Cap蛋白%錶達%純化%鑒定
저원배병독2형%Cap단백%표체%순화%감정
为获得可用于猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)抗体检测的重组抗原Cap蛋白,根据GenBank中发表的PCV20RF2序列设计物,以PCV2 JS株基因组为模板,PCR扩增出无核定位信号(nuclear localization signal,NLS)的ORF2基因片段,插入质粒pET-30a(+)构建重组表达质粒pET-ORF2△NLS,IPTG可诱导该重组菌表达约27 ku大小的重组蛋白.进一步分析发现该蛋白在大肠杆菌中主要以可溶性形式存在；镍柱亲和层析法纯化该蛋白,用PCV2阳性血清进行免疫印迹试验,结果发现纯化的重组蛋白能与PCV2抗体发生特异性反应,表明该纯化的蛋白具有很好的免疫反应原性,可用于临床样本中PCV2抗体的检测.
為穫得可用于豬圓環病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)抗體檢測的重組抗原Cap蛋白,根據GenBank中髮錶的PCV20RF2序列設計物,以PCV2 JS株基因組為模闆,PCR擴增齣無覈定位信號(nuclear localization signal,NLS)的ORF2基因片段,插入質粒pET-30a(+)構建重組錶達質粒pET-ORF2△NLS,IPTG可誘導該重組菌錶達約27 ku大小的重組蛋白.進一步分析髮現該蛋白在大腸桿菌中主要以可溶性形式存在；鎳柱親和層析法純化該蛋白,用PCV2暘性血清進行免疫印跡試驗,結果髮現純化的重組蛋白能與PCV2抗體髮生特異性反應,錶明該純化的蛋白具有很好的免疫反應原性,可用于臨床樣本中PCV2抗體的檢測.
위획득가용우저원배병독2형(porcine circovirus type 2,PCV2)항체검측적중조항원Cap단백,근거GenBank중발표적PCV20RF2서렬설계물,이PCV2 JS주기인조위모판,PCR확증출무핵정위신호(nuclear localization signal,NLS)적ORF2기인편단,삽입질립pET-30a(+)구건중조표체질립pET-ORF2△NLS,IPTG가유도해중조균표체약27 ku대소적중조단백.진일보분석발현해단백재대장간균중주요이가용성형식존재；얼주친화층석법순화해단백,용PCV2양성혈청진행면역인적시험,결과발현순화적중조단백능여PCV2항체발생특이성반응,표명해순화적단백구유흔호적면역반응원성,가용우림상양본중PCV2항체적검측.
