畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2013年
3期
50-53
,共4页
李文良%毛立%张纹纹%江杰元
李文良%毛立%張紋紋%江傑元
리문량%모립%장문문%강걸원
猪瘟病毒%E0%重组杆状病毒%糖基化
豬瘟病毒%E0%重組桿狀病毒%糖基化
저온병독%E0%중조간상병독%당기화
通过PCR方法扩增出包含糖基化信号肽的猪瘟兔化弱毒疫苗株E0 (Ems)蛋白基因,末端引入6×His标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTM HT B载体中,将阳性重组质粒pF-E0转化DH10Bac感受态大肠杆菌,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组Bacmid质粒(rBac-E0).转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rAc-E0.经Western blot鉴定重组蛋白正确表达,且具有良好的抗原性；用糖苷酶PNGase F处理后重组蛋白分子量减小为32 ku,表明重组蛋白为糖基化蛋白.这为进一步研究E0蛋白的功能、亚单位疫苗和诊断试剂的开发奠定了基础.
通過PCR方法擴增齣包含糖基化信號肽的豬瘟兔化弱毒疫苗株E0 (Ems)蛋白基因,末耑引入6×His標籤序列,將其剋隆到Bac-to-Bac桿狀病毒錶達繫統pFastBacTM HT B載體中,將暘性重組質粒pF-E0轉化DH10Bac感受態大腸桿菌,經藍白斑篩選和PCR鑒定,穫得重組Bacmid質粒(rBac-E0).轉染對數生長期的Sf9昆蟲細胞穫得重組桿狀病毒rAc-E0.經Western blot鑒定重組蛋白正確錶達,且具有良好的抗原性；用糖苷酶PNGase F處理後重組蛋白分子量減小為32 ku,錶明重組蛋白為糖基化蛋白.這為進一步研究E0蛋白的功能、亞單位疫苗和診斷試劑的開髮奠定瞭基礎.
통과PCR방법확증출포함당기화신호태적저온토화약독역묘주E0 (Ems)단백기인,말단인입6×His표첨서렬,장기극륭도Bac-to-Bac간상병독표체계통pFastBacTM HT B재체중,장양성중조질립pF-E0전화DH10Bac감수태대장간균,경람백반사선화PCR감정,획득중조Bacmid질립(rBac-E0).전염대수생장기적Sf9곤충세포획득중조간상병독rAc-E0.경Western blot감정중조단백정학표체,차구유량호적항원성；용당감매PNGase F처리후중조단백분자량감소위32 ku,표명중조단백위당기화단백.저위진일보연구E0단백적공능、아단위역묘화진단시제적개발전정료기출.
