东南大学学报（医学版）
東南大學學報（醫學版）
동남대학학보（의학판）
JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2013年
6期
663-669
,共7页
甘精胰岛素%多分子伴侣%共表达
甘精胰島素%多分子伴侶%共錶達
감정이도소%다분자반려%공표체
insulin glargine%molecular chaperones%co-expression
目的：构建甘精胰岛素（ ING）表达载体，提高ING在大肠杆菌中的可溶性表达。方法：在传统方法中ING的A、B链之间用C肽连接，本实验在ING的A、B链之间插入大肠杆菌硫氧还蛋白质（ Trx ）来替代C肽，进行ING的融合表达（ ING-Trx），并进一步使用多分子伴侣GroEL、GroES、触发因子进行共表达。结果：可溶性的ING-Trx融合蛋白约占该目的蛋白质总表达量的35％；多分子伴侣共表达后可溶性ING-Trx的产量提高到ING-Trx总蛋白的78％，初步纯化后其产量为4.5 mg· L-1，是使用分子伴侣前的3倍。结论：用Trx代替C肽不影响A、B链的有效折叠，采用分子伴侣共表达可以显著提高目的蛋白的可溶性。
目的：構建甘精胰島素（ ING）錶達載體，提高ING在大腸桿菌中的可溶性錶達。方法：在傳統方法中ING的A、B鏈之間用C肽連接，本實驗在ING的A、B鏈之間插入大腸桿菌硫氧還蛋白質（ Trx ）來替代C肽，進行ING的融閤錶達（ ING-Trx），併進一步使用多分子伴侶GroEL、GroES、觸髮因子進行共錶達。結果：可溶性的ING-Trx融閤蛋白約佔該目的蛋白質總錶達量的35％；多分子伴侶共錶達後可溶性ING-Trx的產量提高到ING-Trx總蛋白的78％，初步純化後其產量為4.5 mg· L-1，是使用分子伴侶前的3倍。結論：用Trx代替C肽不影響A、B鏈的有效摺疊，採用分子伴侶共錶達可以顯著提高目的蛋白的可溶性。
목적：구건감정이도소（ ING）표체재체，제고ING재대장간균중적가용성표체。방법：재전통방법중ING적A、B련지간용C태련접，본실험재ING적A、B련지간삽입대장간균류양환단백질（ Trx ）래체대C태，진행ING적융합표체（ ING-Trx），병진일보사용다분자반려GroEL、GroES、촉발인자진행공표체。결과：가용성적ING-Trx융합단백약점해목적단백질총표체량적35％；다분자반려공표체후가용성ING-Trx적산량제고도ING-Trx총단백적78％，초보순화후기산량위4.5 mg· L-1，시사용분자반려전적3배。결론：용Trx대체C태불영향A、B련적유효절첩，채용분자반려공표체가이현저제고목적단백적가용성。
Objective:To construct expression vector of insulin glargine ( ING) and increase soluble expression of ING.Methods: C peptide was used to join A chain and B chain of ING in previous studies .In the present research , thioredoxin ( Trx) was inserted between A chain and B chain of ING to replace C peptide .Co-expression of molecular chaperones GroEL , GroES, trigger factor and ING was also used to promote folding of recombinant ING-Trx protein.Results:Soluble ING-Trx accounts for 35% of total expressed ING-Trx while soluble ING-Trx increased to 78%of total ING-Trx protein after co-expression.The yield was about 4.5 mg· L-1 after preliminary purification , three times as much as the production without co-expression of molecular chaperones .Conclusion:In summary , A chain and B chain can fold properly when Trx is used to replace C peptide .Co-expression of ING-Trx with molecular chaperones can greatly increase soluble expression of insulin glargine .
